> De Rol van Vero Cellen in Het Onderzoek van Virale Vaccins
Auteur: AcceGen R&D-Team De Oorsprong van Vero Cellen
Vero cellen zijn erkend door de Wereld Gezondheid Organisatie (WHO) en de Chinese Farmacopee in de productie van vaccins. Vero-cellen, ook bekend als Afrikaanse groene apenniercellen, werden officieel geïsoleerd uit Afrikaanse groene apennieren door Japanse geleerden Yasumura Y en Kawakita Y in 1962. Het was de eerste aneuploidy gehechtheid-afhankelijke cel die in het produceren van menselijke biologische producten en het vestigen van cellijnen en celbank van verschillende generaties tegelijkertijd wordt gebruikt.
virale vaccins is op grote schaal gebruikt bij de preventie van vele ziekten, waaronder rabiës, influenza en pokken. Vaccins zijn echter nog steeds niet betaalbaar voor kwetsbare bevolkingsgroepen in endemische gebieden, de kosten van het vaccin en de enorme behoefte wereldwijd zijn de belangrijkste obstakels voor een billijk en wereldwijd gebruik van humane virale vaccins.
De Verocellen kunnen worden toegepast op vaccinproductie varieert van levende rotavirusvaccins tot levende verzwakte influenzavaccins tot de ontwikkeling van geïnactiveerde hele virusvaccins. Vero-cellen kunnen antivirale proteïne interferon niet tot expressie brengen vanwege hun inherente genetische defecten. Daarom heeft de brede gevoeligheid van Verocellen de ontwikkeling van de productie van vaccins met Verocellen als substraat bevorderd.
Verocellen hebben de volgende voordelen ten opzichte van de primaire en diploïde cellijnen voor de productie van biologische producten. Ten eerste is de celbank gemakkelijk te vestigen en te bewaren, tegelijkertijd kan het continu worden gepasseerd met een snelle groeisnelheid. Ten tweede, hebben Verocellen stabiele genetische eigenschappen en een lage waarschijnlijkheid van malignancy. Ten derde, Vero cellen zijn gevoelig voor een verscheidenheid van virussen en hebben hoge virustiters. Tot slot kunnen Vero-cellen buitengewoon resistent zijn tegen verschillende culturele omstandigheden, en de vereisten zijn niet hoog dat het goed kan groeien op het oppervlak van de microcarrier, wat bewijst dat Vero-cellen een belangrijke waarde hebben in de ontwikkeling van een reeks virale vaccins.
hoe worden adherente Verocellen gekweekt
De groei van Verocellen is afhankelijk van de verankering en Verocellen kunnen zich alleen vermenigvuldigen als ze voorzien zijn van een geschikt oppervlak. Adherente Verocellen werden apart gekweekt in MEM, Medium 199, en DMEM aangevuld met 10% FBS onder een 5% CO2 en 37℃ culturen. De onderzoekers vonden dat Vero cellen, de hoogste celconcentratie 25,6 ± 1,1 × 104 cellen/cm2 in dmem + FBS groep bereikte, die 50,1% in vergelijking met de Mem+FBS groep en 89,6% van de m199+FBS groep (figuur 1) steeg .
figuur 1. Vergelijking van de groei van Verocellen in verschillende kweekmedia (n=5)
Bovendien werden meer sferoïdale dode cellen gevonden in de m199 + FBS medium groep. Concluderend, de dmem + FBS medium groep is meer geschikt voor de groei van Verocellen en werd uiteindelijk geselecteerd voor vervolgonderzoek (figuer2).
Figure2. Verocelgroeifoto ‘ s in verschillende media op dag 4, (1) MEM+FBS, (2) M199+FBS, (3) DMEM+FBS
FBS kunnen Verocellen voorzien van de nodige stoffen voor hechting in vitro, zoals hechting factoren, groeifactoren en hormonen, die in vitro een stabiele omgeving kunnen bieden en celgroei met hoge dichtheid kunnen bevorderen.
het serum is echter een complex mengsel van elementen en de bestanddelen zijn niet volledig helder. Daarom heeft het gebruik van serum in celcultuurtechnologie vele nadelen, die de instabiliteit van het vaccinproductieproces en de moeilijkheid van de controle van de vaccinkwaliteit verhoogde. Onderzoekers zijn begonnen om dierlijke cel serum-vrije media te gebruiken om traditionele runderserummedia te vervangen, die een essentiële ontwikkelingstrend voor virale vaccinproductie is geworden.
aanpassing van adherente Verocellen aan suspensiegroei in IPT-AFM
toepassing: Het gebruik van een nieuwe suspensie vero cellijn in combinatie met IPT-AFM, een in-house ontwikkeld dier-component-vrij medium zal in hoge mate bijdragen aan het verlagen van de vaccinkosten.
adherente Verocellen werden aanvankelijk gekweekt in minimaal essentieel Medium (mem) aangevuld met 10% FBS of IPT-AFM (een in-house ontwikkeld dierbestanddeelvrij medium). De celkweek werd gebruikt als een kolf van het schotschudden bij een zaaidichtheid van 7×104 cellen / cm2, dan cellen werden besmet bij een MOI van 0,1, zonder over te gaan tot een middelgrote uitwisseling.
voor suspensiecultuur werden naast IPT-AFM vijf commerciële serumvrije/chemisch gedefinieerde media getest. Vero cellen werden met behulp van drie verschillende methoden (figuur 3), Vervolgens cellen werden dagelijks gecontroleerd onder kinetische parameters. Voor de beoordeling van de levensvatbaarheid werden cellen bevlekt met trypanblauw (0,2% (w/v) in fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) . Hun resultaten tonen aan dat de opgeschorte verocellen het beste in de derde cultuur groeiden, zoals in figure4 wordt getoond, en de verocellen in opschorting in IPT-AFM konden groeien.
figuur 3. Aanpassing van adherente verocellen aan opschortingscultuur volgens de drie protocollen.
figuur 4. Groei van Verocellen aangepast aan suspensiecultuur in schudkolven volgens 3 verschillende protocollen (gegevens van 12 passages).
conclusie
Het belangrijkste toepassingsgebied van Verocelcultuurmedium-technologie was de ontwikkeling en productie van virale vaccins. Het maken van vaccins met Verocellen als matrix heeft de veiligheid en controleerbaarheid van de productkwaliteit verbeterd.
in de toekomst kunnen Verocellen worden gebruikt bij de ontwikkeling en toepassing van huidige coronavirusvaccins (COVID-19). Het covid-19-virus kan lering trekken uit de ervaring met het ontwikkelen van antirabiësvaccins met Verocellen, waardoor Verocellen de aanhangende toestand omzetten in een suspensiecultuur (serumvrije cultuur). De infectieefficiëntie en virustiter werden gedetecteerd na transfectie met covid-19 virussen.
AcceGen verocell Line
AcceGen cultures and provides the African green monkey kidney cell line-Vero, Vero (AC-free), Vero 76. Voor meer gedetailleerde informatie, bezoek onze website of neem contact op [email protected]
1. Yasumura Y KY: Studies over SV40 in weefselkweek-voorbereidende stap voor kankeronderzoek in vitro. Nihon rinsho 1963, 21: 1201-1215.
2. Barrett PN, Terpening SJ, Snow D, Cobb RR, Kistner O: Verocelltechnologie voor de snelle ontwikkeling van geïnactiveerde vaccins tegen het hele virus voor nieuwe virusziekten. Expert Review of Vaccines 2017, 16 (9): 883-894.
3. Khaled Trabelsi MBZ, Héla Kallel: zuivering van rabiësvirus geproduceerd in Verocellen geteeld in serumvrij medium. vaccin 2019.
4. Shen CF, Guilbault C, Li X, Elahi SM, Ansorge s, Kamen A, Gilbert R: Development of suspension adapted Vero cell culture process technology for production of viral vaccines. Vaccin 2019, 37 (47): 6996-7002.
5. Orr-Burks N, Murray J, Wu W, Kirkwood CD, Todd KV, Jones l, Bakre a, Wang H, Jiang B, Tripp RA: Gene-edited vero cells as rotavirus vaccine substrates. Vaccin: X 2019, 3:100045.
6. Yang J, Guertin P, Jia G, Lv Z, Yang H, Ju d: Large-scale microcarrier culture of HEK293T cells and Vero cells in single-use bioreactors. AMB Express 2019, 9 (1): 70.
7. Samia Rourou MBZ, Héla Kallel: Adaptation of Vero cells to suspension growth for rabies virus production in different serum free media. Vaccin 2019.