UHPLC ja UPLC ovat molemmat nestekromatografiatekniikoita, joita käytetään seoksissa esiintyvien eri komponenttien erottamiseen toisistaan. Kommentti: edellä mainittu lähtökohta merkitsee eroa UHPLC: n ja UPLC: n välillä, kun itse asiassa ne ovat samoja tekniikoita. Vuonna 2004 Waters toi markkinoille UltraPerformance LC (UPLC)-nimisen tekniikan, joka perustuu 2 mikronia pienempiin huokoisiin hiukkasiin ja joka on tavaramerkitty lyhenteellä UPLC. Koska myyjät tulivat markkinoille samanlaisia välineitä UHPLC keksittiin tapa viitata välineitä samanlainen UPLC koska UPLC on Waters tavaramerkki. Nämä kaksi termiä ymmärretään synonyymeiksi. Sekä UHPLC-että UPLC-instrumenttien mahdollistava tekniikka on alle 2 mikronia; useimmat HPLC – menetelmät on kehitetty 2,5-5 mikroninkokoisille hiukkasille. Pienemmät 2-mikronihiukkaset vaativat suuremman paineen toimiakseen, joten UHPLC – tai UPLC-järjestelmien on kyettävä toimimaan yli 6 000 PSI: n, joka on tyypillisesti tavanomaisten HPLC-hiukkasten yläraja.

seos on aine, joka koostuu kahdesta tai useammasta alkuaineesta ja yhdisteestä, jotka eivät ole sitoutuneet toisiinsa kemiallisessa reaktiossa. Kommentti: ”nestekromatografia”on nesteessä yhteen liukoisten komponenttien erottamista. Käyttämällä kolonnia seoksen aineosat vuorovaikuttavat / diffusoituvat kolonnin poikki ja sen huokosiin tai pintaan suuremmassa määrin ja erkanevat toisistaan. Koska sub 2 mikronihiukkaset ovat niin pieniä, diffuusiorata näytteen analyyttien ja stationäärifaasin välillä on lyhyempi ja hyötysuhde suurempi. Kiinteät ydinhiukkaset, jotka ovat nyt nousussa, kapseloituvat pienten hiukkasten pintaan, joten diffuusio polku on pienempi edelleen ja tehokkuus on suurempi, mutta silti riippuu kiinteän ”ytimen ”ympärillä olevan hiukkaskerroksen”paksuudesta”.
HPLC, UHPLC ja UPLC: n edeltäjä tukeutuivat pumppuihin, jotka läpäisivät näyteseosta sisältävän paineistetun nesteen imukykyisten materiaalien läpi. Kommentti: pumppuja tarvitaan sekä UHPLC: llä että UPLC: llä. Kun työnnät nestettä pakatun kolonnin läpi, tarvitaan pumppu, joka tuottaa vastapaineen. Joissakin tapauksissa liikkuva faasi paineistetaan ennen kuin se joutuu kosketuksiin analyyttisen kolonnin kanssa, mutta näyte otetaan käyttöön myöhemmin.

viimeisten 6 vuoden aikana UHPLC ja UPLC ovat nousseet etualalle. Sekä UHPLC että UPLC antavat tutkijoille mahdollisuuden tarttua pienempiin hiukkasiin nopeammin kuin aiemmin oli mahdollista, mutta näiden kahden järjestelmän välillä on keskeisiä eroja. Kommentti: pienempien hiukkasten sijaan uhplc ja UPLC antavat tutkijoille mahdollisuuden tarttua analyyttisempiin haasteisiin nopeammin kuin aiemmin oli mahdollista.

mitä UPLC on?

UPLC (ultra performance liquid kromatography) – järjestelmät otettiin käyttöön ensimmäisen kerran vuonna 2004. Lähes kaksinkertaistamalla kokonaiskäyttöpaineen (15 000 psi) nopeamman virtausnopeuden saavuttamiseksi UPLC: n kehittäjät pystyivät saavuttamaan yhtä suuret tai paremmat erotuskykyiset LC-erotukset paljon lyhyemmillä aikaväleillä. Kommentti: sen sijaan, että ”kaksinkertaistetaan yleinen käyttöpaine nopeamman virtausnopeuden saavuttamiseksi”, on parempi sanoa … ” jotta voidaan hyödyntää 2 mikronin hiukkasia, tarvitaan suurempia paineita.”UPLC-sarakkeen tyypillinen tunnus on 2.1 mm ja yleisesti virtausnopeudet ovat alhaisemmat kuin HPLC, mutta edellä selostetun hyötysuhteen kasvun vuoksi yleinen erotusaika lyhenee. Tehokkuuden, tarkkuuden ja tuottavuuden kannalta tämä oli hyvä uutinen laboratorioille ympäri maailmaa. UPLC on HPLC: n muunnelma, jossa käytetään myös pylväitä ja pumppuja. Kommentti: Puhummepa sitten HPLC: stä, UPLC: stä tai UHPLC: stä, jokainen näistä tekniikoista käyttää pylväitä ja pumppuja.

mitä UHPLC on?

sen sijaan UHPLC (ultra high performance liquid kromatography) toimii 20 000 psi-alueella. Kommentti: Tämä ei yksinkertaisesti pidä paikkaansa. Jotkut UHPLC-järjestelmät voivat nousta niin korkealle, mutta eivät kaikki. Yleensä UPLC-instrumentit ovat pienempiä hajonta -, pienempi tilavuus – (extra column) järjestelmiä, jotka voivat toimia suuremmilla paineilla.? Toisin kuin UPLC, nimi ei ole tavaramerkki, ja se voi viitata useiden valmistajien järjestelmiin. UHPLC-järjestelmät suunniteltiin pieni viipymämäärä mielessä. Kommentti: Viipymämäärä on termi, joka viittaa gradienttierotuksiin; ylimääräinen sarakemäärä ja dispersio ovat parempia termejä. Ylplc: llä on pienemmät viipymämäärät, mutta tämä johtuu siitä, että ylimääräisen sarakkeen tilavuus on minimoitu. Vähäinen äänenvoimakkuus ei ole UPLC-järjestelmän ainoa suorituskykyominaisuus. Ne tarjoavat korkeamman hyötysuhteen kuin UPLC-järjestelmät, mutta ovat myös alttiita tukoksille. Kommentti: en tiedä, mistä tämä tulee. Jos näytettä ei ole valmistettu oikein, on mahdollista tukkia sub 2-mikron UHPLC-tai UPLC-kolonni. Pylväs voi tukkeutua, Ei järjestelmä. Artikkeli UHPLC tai Core-Shell, kumpi on voittaja? käsittelee etuja suhteellisen järjestelmien tarkemmin.

mihin UPLC-ja UHPLC-järjestelmiä käytetään?

UPLC: tä ja UHPLC: tä on käytetty moniin tarkoituksiin, kuten juridisiin, farmaseuttisiin ja lääketieteellisiin tarkoituksiin. Järjestelmät ovat tärkeitä työkaluja myös tutkimuksen ja valmistuksen aloilla. Ilman HPLC: tä, UPLC: tä ja UHPLC: tä tutkijat kamppailevat havaitakseen suorituskykyä parantavien lääkkeiden läsnäolon urheilijoiden antamissa näytteissä, kun taas veren seerumin D-vitamiinitasojen havaitseminen kestäisi paljon kauemmin kuin nykyään. Kommentti: uhplc-ja UPLC-instrumenttien nopeus, resoluutio ja herkkyys tekevät niistä ihanteellisia käytettäväksi MS: n kanssa. Edullisuus ja helppokäyttöisyys uuden sukupolven MS välineitä tekee LC-MS enemmän käytännön enemmän laboratorioita.

nämä teknologiat ovat siis merkittävä edistysaskel. Luonnollisesti tätä artikkelia lukiessa kehitetään entistä nopeampia ja tarkempia teknologioita. Toistaiseksi UPLC-ja UHPLC-järjestelmät ovat kuitenkin edelleen monien tieteellisten pyrkimysten kärjessä.

viime aikoina sekä analyyttisen instrumentoinnin että stationäärifaasikemian kehitys on saanut kromatografit arvioimaan päivittäin käyttämiään järjestelmiä ja menetelmiä uudelleen. Artikkelissa, joka optimoi Core-Shell UHPLC-sarakkeita proteiinien ja peptidien erottelun parantamiseksi, käsitellään tätä yksityiskohtaisemmin.

*
Waters Corporation
34 Maple Street
Milford
MA 01757
USA