erittäin tehokas menetelmä geenien siirtämiseksi nisäkässoluun on retroviraalisilla vektoreilla tapahtuva infektio. Retrovirusinfektion teho paranee merkittävästi, 100-1 000-kertaiseksi joissakin soluissa, kun polybreeni otetaan mukaan infektion aikana. DMSO-shokilla varustettua polybreeniä käytetään myös DNA: n siirron välittäjänä eri solutyypeissä, kuten cho: ssa, kanan alkion fibroblasteissa, NINH-3T3: ssa ja Myeloidisissa soluissa.
protokolla: Retrovirusinfektio
rekombinantti retrovirusvarastot valmistetaan lisäämällä 5mls kasvualustaa ja 5% seerumia lähes konfluenttiseen yksikerroksiseen transfektoituja retroviraalisia pakkaussoluja 100 mm: n levyyn. 24 tunnin kuluttua väliaine poistetaan ja suodatetaan 0,45 um-suodattimen läpi.
tällä rekombinantilla retroviraalikannalla infektoitavia soluja on 500 000 solua 100 mm: n levyä kohti 10mls: ssä täydellistä väliainetta.
24 tuntia myöhemmin poistetaan kasvualusta soluista. Infektoi soluja 2mls: llä viruksen supernatanttia (tai laimentamalla viruskantaa 2mls: ksi), kun läsnä on 5-10ug polybreeniä millilitrassa (lopullinen pitoisuus). Inkuboidaan soluja 3-6 tuntia 37°C: ssa.
lisätään 8 milliä täydellistä väliainetta. Kolme päivää tartunnan jälkeen jaa solut 1: 5 valikointiväliaineeseen.

Toyoshima, K. and Vogt, P. K., 1969. Virologia. 38: 414-426
Coelen, J. R., Jose, D. G. ja May, J. T. 1983. Kaari. Virol. 75: 307-311
Protocol: Transfection
Plate cells at n.50% confluence in complete growth medium.
18-24 tuntia pinnoituksen jälkeen valmistetaan DNA-väliaine-Polybreeniliuos välittömästi ennen käyttöä seuraavasti:
Huomautus: jokainen komponentti on lisättävä oikeassa järjestyksessä.
1.: täydellinen kasvualusta (2mls 60mm levylle ja 3mls
100mm levylle) lämmitettynä 37°C: seen.
2.: plasmidin DNA, 10ng-10ug. Sekoita varovasti.
3rd: Polybreeni lopulliseen pitoisuuteen 5-10ug / ml. Sekoita varovasti
Poista väliaine levyltä ja lisää DNA-väliaine-Polybreeniliuos soluihin. Soluja inkuboidaan 37°C: ssa 6-20 tuntia ja keinutetaan kevyesti silloin tällöin noin 1: n välein.5 tuntia ensimmäisten 6 tunnin aikana.
Poista DNA-Medium-Polybreeniliuos ja päällystä solut varovasti DMSO-iskuliuoksella (15% DMSO 1x HBSS: Specialty Media catalog #s-051-D) 3mls per 60mm astia ja 4mls per 100mm levy. Ravistetaan käsin 10 Sekuntia liuoksen jakamiseksi tasaisesti ja inkuboidaan soluja sitten tasan 4 minuuttia 37°C: ssa.
poista DMSO-iskuliuos välittömästi ja huuhtele solut varovasti kahdesti täydellisellä kasvualustalla, 5 milliä pesua kohti 60 mm: n astiaa kohti, 10 milliä pesua kohti 100 mm: n astiaa kohti
Lisää täydellinen kasvualusta soluihin.
stabiilien transformanttien osalta poistetaan kasvualusta ja jaetaan solut 1:5 valintaväliaineeksi.
ohimenevää ilmentymistä varten poistetaan kasvualusta ja lisätään uusi kasvualusta. Solut ja/tai kasvualusta kerätään 24-72 tunnin kuluttua.

Chaney, W. G. et al., 1986. Somaattisten solujen ja molekyylien genetiikka. Vol. 12, nro 23,
237-244.
Aubin, R. J. et al. 1988. Somaattisten solujen ja molekyylien genetiikka. Vol. 14, nro 2, 155-167.
Chisholm, O. et al., 1998. Nukleiinihappotutkimus. Vol. 16, nro 5, 2352
reagenssi syötetään suodatettuna 0,2 um kalvojen läpi ja hydratoituna steriilillä H20: llä.