mitä Tukiproteiinit ovat?

Proteiinitelineet ovat solun pintareseptorien alajuoksulla olevan signalointikaskadin jäseniä. Tukiproteiinit auttavat välittämään viestin solukalvon ja tuman välillä nopeammin. Ne tekevät tämän toimimalla telakointipaikkana useille proteiinikumppaneille kaskadissa, jotta ne voivat olla lähellä toisiaan. Tämä läheisyys lyhentää aikaa, jonka yksi proteiini kaskadissa tarvitsee löytääkseen kumppaninsa. Jotkut proteiinitelineet pysyvät kuormittamattomina, kunnes aktivoidun kalvoreseptorin viesti saavuttaa ne, minkä jälkeen useat proteiinit telakoituvat niihin kaskadissa. Muut proteiinitelineet telakoituvat kaskadissa oleviin proteiineihin jo ennen kuin aktivoitunut kalvoreseptori lähettää niille viestin, mikä lisää tehokkuutta, jolla viesti välittyy reseptorista tumaan.

Gpcrs ja Tukiproteiinit

g-proteiinikytketyt reseptorit (gpcrs) ovat suuri luokka solun pintaproteiineja, jotka välittävät solunulkoisia signaaleja tumaan. Esimerkki gpcr: stä on adrenaliinihormonia aistiva β-adrenerginen reseptori. Kun ligandi on aktivoitu solun uloimmalla pinnalla, Gpcr: t aktivoivat niiden kognitiiviset g-proteiinit, jotka sijaitsevat sisemmällä solukalvolla. Aktivoidut g-proteiinit liukuvat sitten solukalvon sisäpuolelle aktivoidakseen proteiinien ja entsyymien kaskadin, joka puolestaan vahvistaa gpcr: n saamaa alkuperäistä viestiä. Tukiproteiinit ovat keskeisiä informaation solmukohtia aktivoitujen Gpcr-standardien alapuolella. Telineproteiinit värväävät signalointikaskadin alavirtaan jäseniä sisempään solukalvoon hyvin nopeasti tai etuajassa, jolloin viestin siirtyminen GPCR: stä sytosoliin on tehokasta.

Signalointikaskadin Aktivoitumistilat

solunsisäisen signaloinnin monimutkaisuus on se, että signalointikaskadin proteiineilla on vaihtelevia aktiivisuustiloja (eli off, osittain aktiivinen, täysin aktiivinen). Nämä tilat riippuvat konformaatiomuutoksista, jotka johtuvat vuorovaikutuksista muiden proteiinien kanssa. Ne riippuvat myös moodien, kuten fosfaattiryhmien, ubikitiiniryhmien ja kalsiumionien, läsnäolosta tai puuttumisesta. Signalointiproteiinin aktivoitumistilaa käytetään usein indikaattorina siitä, onko tietty reitti aktivoitunut. Esimerkiksi fosforyloidun MEK: n tai Erkin tulkitaan usein edustavan gpcr: n alajuoksulla solunsisäisen signalointireitin aktivoitumista. Lisäksi näillä signalointiproteiineilla voi olla useita fosforylaatiopaikkoja, joiden erilaiset yhdistelmät vaikuttavat proteiinin aktiivisuuteen tai puoliintumisaikaan. Proteiinien, kuten mekin ja Erkin, tiedetään sitoutuvan lähelle toisiaan tukiproteiineina. Telineen proteiinien kykyä sitoa MEK: ta ja ERK: ta säännellään myös telineen aktivointitilan suhteen, joka muuttuu translaation jälkeisen modifioinnin jälkeen lisäämällä kemiallisia osia.

oikean epitoopin valitseminen tarkkaa tietoa varten

edellä mainittu solunsisäisen signaloinnin monimutkaisuus on juuri se, miksi oikeiden vasta-aineiden poiminta on ratkaisevan tärkeää, kun tutkijat pyrkivät määrittämään tarkasti solun tilan vastauksena solunulkoisiin ärsykkeisiin. Jokainen proteiinin tai fosforylaatiokohdan aktiivinen konformaatio voi toimia erilaisena epitooppina, johon vasta-aine voi sitoutua. Näin ollen vasta-aineet, jotka on suunniteltu havaitsemaan kemiallisen osan läsnäolo tai puuttuminen signalointiproteiinista, voivat antaa tutkijoille selkeän kuvan siitä, mikä reitti on aktivoitunut ja missä määrin. Fosforyloidut epitoopit ovat usein immunoblottauksen ja In situ-immunolokalisaatiomääritysten kohteita. Koska proteiinilla voi olla useita fosforylaatiopaikkoja, joista jokainen vaikuttaa proteiiniin eri tavoin, sen lisäksi, että sillä on useita alueita, kuten ubikitinaatio, oikean epitoopin valitseminen havaitsemiseksi on hedelmällistä – mutta ei – yksityistä-työtä.

Useita epitooppeja, joko samassa proteiinissa tai eri proteiineissa, voidaan havaita samanaikaisesti tai peräkkäin samassa läikässä tai samoissa soluissa. Siksi on tärkeää, että oikea isäntälaji primaarisille ja sekundaarisille vasta-aineille katsotaan etukäteen. Yhden domeenin vasta-aineet ovat myös hyödyllisiä näissä kokeissa, mikä lisää samassa määrityksessä käytettävien vasta-aineiden yhdistelmien monipuolisuutta.

sekä monoklonaaliset että polyklonaaliset vasta-aineet ovat hyödyllisiä solunsisäisten signalointikaskadien tilan havaitsemisessa. Vasta-aineiden valinta-oppaamme tekee oikean vasta-aineyhdistelmän valitsemisesta helppoa. Siinä otetaan huomioon muun muassa yksilölaji, isäntälaji, haluttu spesifisyys ja ristireaktiivisuus. Vasta-aineiden valintaopas johdattaa sinut parhaisiin vaihtoehtoihin yksikäyttöisille vasta-aineille tai niille, joita käytät useissa sovelluksissa. Oikea yhdistelmä vasta-aineita kohdennetaan strategisia epitooppeja tuo selkeyttä tilaan solunsisäinen signalointi cascade.