Author: AcceGen r&D Team

alkuperä vero-solut

vero-solut ovat Maailman terveysjärjestön (WHO) ja Kiinan farmakopean tunnustamia rokotteiden valmistuksessa. Japanilaiset tutkijat Yasumura Y ja Kawakita Y eristivät virallisesti afrikkalaisen vihreän apinan munuaisista Vero-solut, jotka tunnetaan myös nimellä African green monkey kidney cells, vuonna 1962. Se oli ensimmäinen aneuploidian kiinnittymisriippuvainen solu, jota käytettiin ihmisen biologisten tuotteiden tuottamiseen ja eri sukupolvien solulinjojen ja solupankin muodostamiseen yhtä aikaa.

Vero-solujen ja virusrokotteiden suhdetta

virusrokotteita on käytetty laajalti monien tautien, kuten raivotaudin, influenssan ja isorokon, ehkäisyssä. Rokotteet eivät kuitenkaan ole vieläkään kohtuuhintaisia heikossa asemassa oleville väestöryhmille endeemisillä alueilla, ja rokotteen kustannukset ja valtava tarve maailmanlaajuisesti ovat suurimmat esteet ihmisten virusrokotteiden oikeudenmukaiselle ja maailmanlaajuiselle käytölle.

Vero-soluja voidaan käyttää rokotetuotantoalueille elävistä rotavirusrokotteista eläviin heikennettyihin influenssarokotteisiin ja inaktivoitujen kokovirusrokotteiden kehittämiseen. Vero-solut eivät kykene ilmentämään antiviraalista proteiini-interferonia niiden synnynnäisten geenivirheiden vuoksi. Siksi Vero-solujen laaja herkkyys on edistänyt rokotteen tuotannon kehittymistä käyttämällä vero-soluja substraattina.

Vero-soluilla on seuraavat edut verrattuna primaarisiin ja diploidisiin solulinjoihin biologisten tuotteiden tuottamiseksi. Ensinnäkin solupankki on helppo luoda ja säilyttää, samalla se voidaan jatkuvasti siirtää nopealla kasvunopeudella. Toiseksi Vero-soluilla on vakaat geneettiset ominaisuudet ja alhainen maligniteetin todennäköisyys. Kolmanneksi Vero-solut ovat herkkiä erilaisille viruksille ja niillä on korkeat viruspitoisuudet. Lopuksi Vero-solut voisivat kestää erittäin hyvin erilaisia kulttuuriolosuhteita, eivätkä vaatimukset ole korkeat, että se voi kasvaa hyvin microcarrierin pinnalla, mikä osoittaa, että Vero-soluilla on merkittävää arvoa virusrokotteiden sarjan kehittämisessä.

miten viljelyyn kiinnittyneitä Vero-soluja viljellään

Vero-solujen kasvu on ankkurointiriippuvaista, ja Vero-solut voivat lisääntyä vain, jos niillä on sopiva pinta. Kiinnittyneet Vero-solut viljeltiin erikseen mem, Medium 199 ja dmem täydennettynä 10% FBS: llä 5% CO2-ja 37℃ – viljelmissä. Tutkijat havaitsivat, että Vero-solujen korkein solupitoisuus oli 25,6 ± 1,1 × 104 solua/cm2 dmem + FBS-ryhmässä, joka kasvoi 50,1% verrattuna MEM+FBS-ryhmään ja 89,6% m199+FBS-ryhmästä (kuvio1) .

kuva1. Verosolukasvun vertailu eri viljelyaineissa (N=5)

lisäksi m199 + FBS-elatusaineryhmästä löytyi enemmän pallomaisia kuolleita soluja. Yhteenvetona voidaan todeta, että dmem + FBS-keskiryhmä soveltuu paremmin Vero-solujen kasvuun, ja se valittiin lopulta myöhempään tutkimukseen (figuer2).

kuva2. Vero cell growth pictures in different media on day 4, (1) MEM+FBS, (2) M199+FBS, (3) dmem+FBS

FBS voi tarjota Vero-soluille tarvittavat aineet kiinnittymisviljelyyn in vitro, kuten kiinnittymistekijät, kasvutekijät ja hormonit, jotka voisivat tarjota vakaan ympäristön in vitro ja edistää tiheää solujen kasvua.

seerumi on kuitenkin monimutkainen alkuaineiden seos, eivätkä sen komponentit ole täysin selviä. Siksi seerumin käytöllä soluviljelytekniikassa on monia haittoja, jotka lisäsivät rokotteen valmistusprosessin epävakautta ja rokotteen laadunvalvonnan vaikeutta. Tutkijat ovat alkaneet käyttää eläinsoluista vapaata seerumiväliainetta korvaamaan perinteistä naudan seerumiväliainetta, josta on tullut keskeinen kehityssuunta virusrokotteen tuotannossa.

kiinnittyneiden Vero-solujen sopeutuminen suspensiokasvuun IPT-AFM: ssä

sovellus: Uuden Suspension Vero-solulinjan käyttö yhdessä IPT-AFM: n kanssa, joka on itse kehitetty eläinkomponenteista vapaa väline, auttaa suuresti vähentämään rokotteen kustannuksia.

kiinnittyneitä Vero-soluja kasvatettiin aluksi joko välttämättömällä Vähimmäisalustalla (mem), jota täydennettiin 10%: lla FBS: ää tai IPT-AFM: llä (kehitetty eläinkomponenteista vapaa kasvualusta). Soluviljelmää käytettiin ravistuspullona kylvötiheydellä 7×104 solua / cm2, minkä jälkeen solut infektoitiin MOI: lla 0,1, ilman että siirryttiin väliainevaihtoon.

suspensioviljelmän osalta IPT-AFM: n vieressä testattiin viisi kaupallista seerumitonta / kemiallisesti määriteltyä väliainetta. Vero-solut käyttivät kolmea eri menetelmää (kuva3), minkä jälkeen soluja seurattiin päivittäin kineettisten parametrien joukossa. Elinkelpoisuuden arviointia varten solut värjättiin trypansinisellä (0,2% (w/v) fosfaattipuskuroidussa suolaliuoksessa (PBS) . Niiden tulokset osoittavat, että suspendoidut Vero-solut kasvoivat parhaiten kolmannessa viljelmässä, kuten kuviossa 4 osoitetaan, ja Vero-solut pystyivät kasvamaan suspensiossa IPT-AFM: ssä.

kuva3. Kiinnittyneiden Vero-solujen Mukauttaminen suspensioviljelmään kolmen protokollan mukaisesti.

kuva4. Ravistuspulloissa suspensioviljelyyn sopeutuneiden Vero-solujen kasvu 3 eri protokollan mukaisesti (tiedot 12 kohdasta).

johtopäätös

Vero-soluviljelyalustateknologian pääasiallinen sovellusalue oli virusrokotteiden kehittäminen ja tuotanto. Rokotteiden valmistaminen matriisina Vero-soluista on parantanut tuotteiden laadun turvallisuutta ja hallittavuutta.

tulevaisuudessa Vero-soluja voidaan käyttää nykyisten KORONAVIRUSROKOTTEIDEN (COVID-19) kehittämisessä ja soveltamisessa. COVID-19-virus voi oppia kokemuksista, joita on saatu Rabiesvirusrokotteiden kehittämisestä Vero-soluilla, mikä sai Vero-solut muuttamaan tarttuneen tilan suspensioviljelmäksi (seerumiton viljelmä). Tartunnan tehokkuus ja virustiitteri havaittiin COVID-19-virusten aiheuttaman verensiirron jälkeen.

AcceGen Vero Cell Line

AcceGen cultures and provides the African green monkey kidney cell line — Vero, Vero (AC-free), Vero 76. Lisätietoja saat verkkosivuiltamme tai ota yhteyttä [email protected]

1. Yasumura Y KY: Studies on SV40 in tissue culture-preliminary step for cancer research in vitro. Nihon rinsho 1963, 21: 1201-1215.

2. Barrett PN, Terpening SJ, Snow D, Cobb RR, Kistner O: Vero cell technology for rapid development of inactivated whole virus rokottaa for emerging virus diseases. Ammattilaisten arvostelun tuottaa Vaccines 2017, 16 (9): 883-894.

3. Khaled Trabelsi MBZ, Héla Kallel: Purification of rabies virus produced in Vero cells growted in serum free medium. rokote 2019.

4. Shen CF, Guilbault C, Li X, Elahi SM, Ansorge s, Kamen a, Gilbert R: suspension adapted Vero cell culture process technology for production of virus vaccines. Rokote 2019, 37 (47): 6996-7002.

5. Orr-Burks n, Murray J, Wu W, Kirkwood CD, Todd KV, Jones l, Bakre a, Wang H, Jiang B, Tripp RA: geenien muokkaamat vero-solut rotavirusrokotteen substraatteina. Rokote: X 2019, 3:100045.

6. Yang J, Guertin P, Jia G, LV Z, Yang H, Ju d: Hek293t-solujen ja Vero-solujen laajamittainen mikrokartioviljely kertakäyttöisissä bioreaktoreissa. AMB Express 2019, 9(1): 70.

7. Samia Rourou MBZ, Héla Kallel:Adaptation of Vero cells to suspension growth for rabies virus production in different serum free media. Rokote 2019.