Il Ruolo delle Cellule Vero nella Ricerca di Vaccini Virali
Autore: AcceGen R&D L’Origine delle Cellule Vero
cellule Vero sono riconosciuti dall’Organizzazione Mondiale della Sanità (OMS) e Farmacopea Cinese nella produzione di vaccini. Le cellule Vero, note anche come cellule renali di scimmia verde africana, sono state ufficialmente isolate dai reni di scimmia verde africana dagli studiosi giapponesi Yasumura Y e Kawakita Y nel 1962. E ‘ stata la prima cellula aneuploidia attaccamento-dipendente utilizzato nella produzione di prodotti biologici umani e stabilire linee cellulari e banca cellulare di diverse generazioni allo stesso tempo.
I vaccini virali sono stati ampiamente utilizzati nella prevenzione di molte malattie, tra cui rabbia, influenza e vaiolo. Tuttavia, i vaccini non sono ancora accessibili per le popolazioni vulnerabili nelle aree endemiche, il costo del vaccino e l’enorme bisogno in tutto il mondo sono i principali ostacoli per un uso equo e globale dei vaccini virali umani.
Le cellule Vero possono essere applicate alle gamme di produzione di vaccini, dai vaccini vivi contro il rotavirus ai vaccini vivi attenuati contro l’influenza fino allo sviluppo di vaccini inattivati contro virus interi. Le cellule Vero non possono esprimere interferone proteico antivirale a causa dei loro difetti genetici intrinseci. Pertanto, l’ampia suscettibilità delle cellule Vero ha promosso lo sviluppo della produzione di vaccini utilizzando le cellule Vero come substrato.
Le cellule Vero presentano i seguenti vantaggi rispetto alle linee cellulari primarie e diploidi per la produzione di prodotti biologici. In primo luogo, la banca cellulare è facile da stabilire e conservare, allo stesso tempo può essere continuamente passata con un tasso di crescita veloce. In secondo luogo, le cellule Vero hanno tratti genetici stabili e una bassa probabilità di malignità. In terzo luogo, le cellule Vero sono sensibili a una varietà di virus e hanno alti titoli di virus. Infine, le cellule Vero potrebbe estremamente resistente alle varie condizioni culturali, e le esigenze non sono elevati che può crescere bene sulla superficie del microcarrier, il che dimostra che le cellule Vero hanno un valore significativo nello sviluppo di una serie di vaccini virali.
Come coltivare le cellule Vero aderenti
La crescita delle cellule Vero dipende dall’ancoraggio e le cellule Vero possono proliferare solo se dotate di una superficie adatta. Le cellule Vero aderenti sono state coltivate separatamente in MEM, Medium 199 e DMEM integrate con 10% FBS sotto colture di CO2 e 37℃ al 5%. I ricercatori hanno scoperto che le cellule Vero, la più alta concentrazione di cellule ha raggiunto 25,6 ± 1,1 × 104 cellule / cm2 nel gruppo DMEM + FBS, che è aumentato del 50,1% rispetto al gruppo MEM + FBS e all ‘ 89,6% del gruppo M199+FBS (figura1) .
Figura 1. Confronto della crescita delle cellule Vero in diversi terreni di coltura (n=5)
Inoltre, più cellule morte sferoidali sono state trovate nel gruppo medio M199 + FBS. In conclusione, il gruppo medio DMEM + FBS è più adatto per la crescita delle cellule Vero ed è stato infine selezionato per la ricerca successiva (figuer2).
Figura2. Immagini di crescita delle cellule Vero in diversi media il giorno 4, (1) MEM+FBS, (2) M199+FBS, (3) DMEM+FBS
FBS può fornire alle cellule Vero le sostanze necessarie per la coltura di attaccamento in vitro, come fattori di attaccamento, fattori di crescita e ormoni, che potrebbero fornire un ambiente stabile in vitro e promuovere la crescita cellulare ad
Tuttavia, il siero è una miscela complessa di elementi e i suoi componenti non sono completamente chiari. Pertanto, l’uso del siero nella tecnologia di coltura cellulare presenta molti svantaggi, che hanno aumentato l’instabilità del processo di produzione del vaccino e la difficoltà del controllo della qualità del vaccino. I ricercatori hanno iniziato a utilizzare mezzi siero-free di cellule animali per sostituire i tradizionali mezzi di siero bovino, che è diventato un trend di sviluppo essenziale per la produzione di vaccini virali.
Adattamento delle cellule Vero aderenti alla crescita della sospensione in IPT-AFM
Applicazione: L’uso di una nuova linea cellulare di sospensione Vero combinata con IPT-AFM, un mezzo senza componenti animali sviluppato internamente contribuirà notevolmente a ridurre il costo del vaccino.
Le cellule Vero aderenti sono state inizialmente coltivate in un mezzo minimo essenziale (MEM) integrato con 10% FBS o IPT-AFM (un mezzo animale senza componenti sviluppato internamente). La coltura cellulare è stata utilizzata come pallone di scossa del deflettore ad una densità di semina di 7×104 cellule / cm2, quindi le cellule sono state infettate a un MOI di 0,1, senza procedere a uno scambio medio.
Per la coltura in sospensione, sono stati testati cinque mezzi commerciali privi di siero/chimicamente definiti accanto a IPT-AFM. Le cellule Vero utilizzavano tre diversi metodi (figura 3), quindi le cellule venivano monitorate quotidianamente tra i parametri cinetici. Per la valutazione della vitalità, le cellule sono state colorate con blu di tripano (0,2% (p/v) in soluzione salina tamponata con fosfato (PBS) . I loro risultati mostrano che le cellule Vero sospese crescevano meglio nella terza coltura, come mostrato in figura4, e le cellule Vero erano in grado di crescere in sospensione in IPT-AFM.
Figura3. Adattamento delle cellule Vero aderenti alla coltura in sospensione secondo i tre protocolli.
Figura4. Crescita di cellule Vero adattate alla coltura in sospensione in flaconi shake secondo 3 diversi protocolli (dati da 12 passaggi).
Conclusione
La principale area di applicazione della tecnologia Vero cell culture medium è stata lo sviluppo e la produzione di vaccini virali. La produzione di vaccini utilizzando cellule Vero come matrice ha migliorato la sicurezza e la controllabilità della qualità del prodotto.
In futuro, le cellule Vero possono essere utilizzate nello sviluppo e nell’applicazione degli attuali vaccini contro il coronavirus (COVID-19). Il virus COVID – 19 può imparare dall’esperienza di sviluppare vaccini contro il virus della rabbia usando le cellule Vero, che hanno reso le cellule Vero trasformare lo stato aderente in coltura di sospensione (coltura senza siero). L’efficienza dell’infezione e il titolo del virus sono stati rilevati dopo la trasfezione con virus COVID-19.
Linea cellulare AcceGen Vero
Accegen culture e fornisce la linea cellulare rene scimmia verde africano-Vero, Vero (AC-free), Vero 76. Per informazioni più dettagliate, si prega di visitare il nostro sito web o contattare [email protected]
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