Forfatter: AcceGen R&D Team

Opprinnelsen til vero celler

Vero Celler Er Anerkjent av verdens helseorganisasjon (who) Og Kinesisk pharmacopoeia I Å Produsere vaksiner. Vero-celler, Også kjent som Afrikanske grønne apenyreceller, ble offisielt isolert fra Afrikanske grønne apenyrer av Japanske lærde Yasumura Y Og Kawakita Y i 1962. Det var den første aneuploidy vedleggsavhengige cellen som ble brukt til å produsere humane biologiske produkter og etablere cellelinjer og cellebank av forskjellige generasjoner samtidig.

Forholdet Mellom Vero Celler og Virale Vaksiner

Virale vaksiner har vært mye brukt i å forebygge mange sykdommer, inkludert rabies, influensa og kopper. Imidlertid er vaksiner fortsatt ikke rimelige for sårbare befolkninger i endemiske områder, kostnaden for vaksinen og det enorme behovet over hele verden er de viktigste hindrene for rettferdig og global bruk av humane virusvaksiner.Vero-cellene kan brukes på vaksineproduksjonsområder fra levende rotavirusvaksiner til levende svekkede influensavaksiner til utvikling av inaktiverte hele virusvaksiner. Vero-celler kan ikke uttrykke antiviralt proteininterferon på grunn av deres iboende genetiske defekter. Derfor har den brede følsomheten Til Vero-celler fremmet utviklingen av vaksineproduksjon ved Bruk Av Vero-celler som substrat.

Vero-celler har følgende fordeler sammenlignet med de primære og diploide cellelinjene for produksjon av biologiske produkter. For det første er cellebanken lett å etablere og bevare, samtidig kan den kontinuerlig passere med en rask vekst. For Det Andre Har Vero-celler stabile genetiske egenskaper og lav sannsynlighet for malignitet. For Det tredje Er Vero-celler følsomme for en rekke virus og har høye virustitere. Endelig Kan Vero-celler være svært motstandsdyktige mot ulike kulturelle forhold, og kravene er ikke høye at det kan vokse godt på overflaten av mikrocarrier, noe som viser At Vero-celler har betydelig verdi i utviklingen av en serie virusvaksiner.

Hvordan Kultur adherent Vero-Celler

veksten Av Vero-celler er forankringsavhengig, Og Vero-celler kan bare proliferere når de er utstyrt med en egnet overflate. Adherent Vero celler ble dyrket separat I MEM, Medium 199, OG DMEM supplert med 10% FBS under en 5% CO2 og 37℃ kulturer. Forskerne fant At Vero-celler, den høyeste cellekonsentrasjonen, nådde 25,6 ± 1,1 × 104 celler / cm2 I DMEM + FBS-gruppen, noe som økte 50,1% sammenlignet MED MEM + FBS-gruppen og 89,6% Av M199 + fbs-gruppen (figure1) .

figur1. Sammenligning Av Vero cellevekst i forskjellige kulturmedier (n=5)

dessuten ble flere sfæroide døde celler funnet I m199 + fbs medium-gruppen. TIL slutt ER DMEM + fbs mediumgruppen mer egnet for vekst Av Vero-celler og ble til slutt valgt for etterfølgende forskning (figuer2).

figur2. Vero celle vekst bilder i ulike medier på dag 4, (1) MEM+FBS, (2) M199+FBS, (3) DMEM+FBS

FBS kan gi Vero celler med de nødvendige stoffer for feste kultur in vitro, som vedlegg faktorer, vekstfaktorer og hormoner, som kan gi et stabilt miljø in vitro og fremme høy tetthet cellevekst.

serumet er imidlertid en kompleks blanding av elementer, og dets komponenter er ikke helt klare. Derfor har bruken av serum i cellekulturteknologi mange ulemper, noe som økte ustabiliteten til vaksineproduksjonsprosessen og vanskeligheten med vaksinekvalitetskontroll. Forskere har begynt å bruke dyrecelle serumfrie medier for å erstatte tradisjonelle bovine serummedier, som har blitt en viktig utviklingstrend for virusvaksineproduksjon.

Tilpasning Av adherente Vero-celler til suspensjonsvekst i IPT-AFM

Søknad: Bruken Av en ny suspensjon Vero cellelinje kombinert med IPT-AFM, et internt utviklet dyrekomponentfritt medium, vil bidra sterkt til å redusere vaksinekostnadene.Adherente Vero-Celler ble opprinnelig dyrket enten I Minimum Essensiell Medium (Mem) supplert med 10% FBS eller IPT-AFM (et internt utviklet dyrekomponentfritt medium). Cellekultur ble brukt som en baffel shake kolbe ved en såddtetthet på 7×104 celler / cm2, Da Ble Celler infisert ved EN MOI på 0,1, uten å gå videre til en middels utveksling.for suspensjonskultur ble fem kommersielle serumfrie/kjemisk definerte medier testet ved SIDEN av IPT-AFM. Vero-celler brukte tre forskjellige metoder (figure3), da ble celler overvåket daglig blant kinetiske parametere. For levedyktighetsvurdering ble celler farget med trypanblå (0,2% (w / v)i fosfatbufret saltvann (PBS) . Resultatene viser at suspenderte Vero-celler vokste best i den tredje kulturen, som vist i figure4, og Vero-celler kunne vokse i suspensjon i IPT-AFM.

figur3. Tilpasning Av adherente Vero-celler til suspensjonskultur i henhold til de tre protokollene.

figure4. Vekst Av Vero-celler tilpasset suspensjonskultur i ristekolber i henhold til 3 forskjellige protokoller(data fra 12 passasjer).

Konklusjon

det viktigste bruksområdet For Vero cellekultur medium teknologi var utvikling og produksjon av virale vaksiner. Å lage vaksiner ved Hjelp Av Vero-celler som matrise har forbedret sikkerheten og kontrollerbarheten av produktkvaliteten.I fremtiden Kan Vero-celler brukes i utvikling og anvendelse av nåværende koronavirusvaksiner (COVID-19). COVID-19-virus kan lære av erfaringen med å utvikle rabiesvaksiner ved Bruk Av Vero-celler, noe Som fikk Vero-celler til å omdanne den vedheftende tilstanden til suspensjonskultur (serumfri kultur). Infeksjonseffektiviteten og virustiteren ble påvist etter overføring MED COVID-19-virus.

AcceGen Vero Cellelinje

AcceGen kulturer og gir Den Afrikanske grønn ape nyre cellelinje-Vero, Vero (AC-fri), Vero 76. For mer detaljert informasjon, vennligst besøk vår hjemmeside eller kontakt [email protected]

1. Yasumura Y KY: Studier PÅ SV40 i vevskultur-foreløpig trinn for kreftforskning in vitro. Nihon rinsho 1963, 21: 1201-1215.

2. Barrett PN, Terpening SJ, Snø D, Cobb RR, Kistner O: Vero celleteknologi for rask utvikling av inaktiverte hele virusvaksiner for nye virussykdommer. Ekspert Gjennomgang Av Vaksiner 2017, 16 (9): 883-894.

3. Khaled Trabelsi MBZ, Hé Kallel: Rensing av rabiesvirus produsert I Vero-celler dyrket i serumfritt medium. vaksine 2019.

4. Shen CF, Guilbault C, Li X, Elahi SM, Ansorge S, Kamen A, Gilbert R: utvikling av suspensjon tilpasset Vero cellekultur prosessteknologi for produksjon av virusvaksiner. Vaksine 2019, 37 (47): 6996-7002.

5. Orr-Burks N, Murray J, Wu W, Kirkwood CD, Todd KV, Jones L, Bakke A, Wang H, Jiang B, Tripp RA: Genredigerte vero-celler som rotavirus-vaksinesubstrater. Vaksine: X 2019, 3: 100045.

6. Yang J, Guertin P, Jia G, Lv Z, Yang H, Ju D: Storskala mikrocarrier kultur AV HEK293T celler og Vero celler i engangs bioreaktorer. AMB Express 2019, 9 (1): 70.

7. Samia Rourou MBZ, Hé Kallel: Tilpasning Av Vero-celler til suspensjonsvekst for rabiesvirusproduksjon i forskjellige serumfrie medier. Vaksine 2019.