en svært effektiv metode for genoverføring til pattedyrcelle er gjennom infeksjon med retrovirale vektorer. Effektiviteten av retroviral infeksjon økes betydelig, 100 til 1000 ganger i noen celler, ved å inkludere polybren under infeksjonen. Polybrene med DMSO-sjokk brukes også til å formidle DNA-overføring til en rekke celletyper, som CHO, kyllingembryofibroblaster, NINH-3T3 og Myeloide celler.
Protokoll: Rekombinante retrovirale lagre fremstilles ved å tilsette 5 ml vekstmedium med 5% serum til et nær konfluent monolag av transfiserte retrovirale emballasjeceller i en 100 mm plate. Etter 24 timer fjernes mediet og filtreres gjennom et 0,45 um filter.
Celler som skal infiseres med denne rekombinante retrovirale bestanden, er belagt på 500.000 celler per 100mm plate i 10mls komplett medium.
24 timer senere, fjern vekstmediet fra cellene. Infiser celler med 2mls av viral supernatant (eller en fortynning av virusbestanden i 2mls) i nærvær av 5ug til 10ug polybren per ml (endelig konsentrasjon). Inkuber celler i 3 til 6 timer ved 37°C.
Legg til 8mls komplett medium. Tre dager etter infeksjon, del cellene 1: 5 i utvalgsmedium.

Toyoshima, K. Og Vogt, P. K., 1969. Virologi. 38: 414-426
Coelen, J. R., Jose, D. G. og May, J. T. 1983. Arch. Virol. 75: 307-311
Protokoll: Transfeksjon
Plate celler på ca 50% samløpet i fullstendig vekst medium.
18 til 24 timer etter plating, forberede DNA-Medium-Polybrene løsning, umiddelbart før bruk som følger:
Merk: Hver komponent må tilsettes i riktig rekkefølge.
1st: Komplett vekstmedium (2mls for en 60mm plate og 3mls for en 100mm plate) oppvarmet til 37°C.
2nd: Plasmid DNA, 10NG til 10ug. Bland forsiktig.
3.: Polybrene til en endelig konsentrasjon på 5ug til 10ug per ml. Bland forsiktig
Fjern medium fra platen og legg TIL DNA-Medium-Polybrenoppløsning til celler. Inkuber celler ved 37°C i 6 til 20 timer med sporadisk mild rocking omtrent hver 1.5 timer for de første 6 timene. Fjern DNA-Medium-Polybrenløsning og legg forsiktig celler med DMSO-sjokkløsning (15% DMSO I 1X HBSS: Spesialmediekatalog #S-051-D) 3mls per 60mm tallerken og 4mls per 100mm plate. Manuelt rock fatet i 10 sekunder for å fordele løsningen, og deretter ruge cellene for nøyaktig 4 minutter på 37°C.
umiddelbart fjerne DMSO sjokk løsning og forsiktig skylle cellene to ganger med fullstendig vekst medium, 5mls per vask per 60mm fatet, 10mls per vask per 100mm fatet
Legge fullstendig vekst medium til cellene .
For Stabile transformanter, fjern vekstmediet og del cellene 1:5 i utvalgsmedium.
for forbigående uttrykk, fjern vekstmediet og legg til friskt vekstmedium. Høstceller og / eller medium etter 24 til 72 timer. Chaney, W. G. et al., 1986. Somatisk Celle Og Molekylær Genetikk. Vol. 12, nr 23,
237-244.
Aubin, R. J. et al. 1988. Somatisk Celle Og Molekylær Genetikk. Vol. 14, nr. 2, 155-167. Chisholm, O. Et al., 1998. Nukleinsyrer Forskning. Vol. 16, no. 5, 2352
Reagens leveres filtrert gjennom 0.2 um membraner og hydrert med steril H20.