análise da expressão da porina durante a análise da MIC. A) as proteínas de membrana foram isoladas por extracção de Sarkosilo, e 10 µg foram separadas em 8 a 12% de géis de bis-Tris acrilamida antes da coloração de Coomassie. Lane 1, “9; lane 2,” 9ΔPorA; lane 3, ” 9ΔPorB. B) As amostras do último poço de turvação foram revestidas de ágar BHI e imunoblotadas com o MAb mn14c11.6 específico para a PorA.

aMICs são relatados como último poço em que a turbidez foi observada. O negrito indica uma susceptibilidade reduzida de “9ΔPorB”.os nossos resultados confirmaram que a perda da expressão porb meningocócica aumenta a resistência à tetraciclina (11). Mutações em PorB também contribuem para a resistência à tetraciclina em N. gonorrhoeae (9, 15). A terapêutica combinada recomendada para N. gonorrhoeae multiply resistente inclui ceftriaxona injectável e doxiciclina oral ou azitromicina (16). Neste contexto, é de salientar que a estirpe mutante meningocócica ” 9ΔPorB reduziu a susceptibilidade à doxiciclina. Notámos uma diminuição da susceptibilidade à cefalotina para o ” 9ΔPorB e também para as cefalosporinas cefotaxima e ceftazidima. Um relatório anterior relacionou a mutação Porb de N. meningitidis com um aumento da resistência à cefsulodina (11). In N. gonorrhoeae, as variantes PorB loop 3 também contribuem para o aumento da resistência à cefalosporina (17). A nossa confirmação de que a Neisseria porb modula a susceptibilidade à cefalosporina aumenta a possibilidade de que a redução da susceptibilidade a esta classe possa surgir clinicamente ou ser facilitada por mutações na PorB em meningococos ou gonococos.

O uso de fluoroquinolona já não é recomendado para a infecção gonocócica (18), e as mutações pontuais na Porb1b de N. gonorrhoeae contribuem para a diminuição da susceptibilidade da N. gonorrhoeae à ciprofloxacina. As alterações da expressão na porina gonocócica alteram a resistência à ciprofloxacina (19); descobrimos que a mutação da PorB meningocócica também resulta numa reduzida susceptibilidade à ciprofloxacina. Inversamente, esta estirpe era mais suscetível à rifampina, a outra grande escolha para a profilaxia meningocócica, talvez através de uma arquitetura alterada da membrana, como foi sugerido para a resistência alterada da rifamicina da Acinetobacter baumannii resistente à colistina (20).em contrapartida, não foram observadas alterações na susceptibilidade de “9ΔPorA” em comparação com a estirpe original PorA+ para qualquer um dos antibióticos testados (Quadro 1). Isto sugere que ou PorA não tem papel direto na entrada de antimicrobianos na célula ou há seleção para a expressão reduzida pora através da variação de fase durante o teste MIC, quer na estirpe parental ou no ” 9ΔPorB, potencialmente mascarando a entrada de antibióticos mediados pora. Para avaliar isto, isolámos bactérias do poço final no qual foi observada turvação e avaliámos a expressão PorA por imunoblotting em colónias utilizando o anticorpo monoclonal anti-P1.7 murine (MAb) MN14C11.6 (obtido a partir de NIBSC, Reino Unido). Como controlos, a reactividade foi comparada entre a estirpe parental “9 e a estirpe mutante de PorA” 9ΔPorA. Isto mostrou que a expressão PorA não foi alterada entre os poços de controle e após a exposição a qualquer um dos antimicrobianos testados (ver Fig. 1B); assim, a susceptibilidade diminuída da ” 9ΔPorB não se deve a níveis de expressão alterados da PorA.

nossos resultados são consistentes com relatórios anteriores para um papel para N. meningitidis PorB em cefalosporinas e resistência à tetraciclina (9, 11, 15). Os paralelos com porb1b gonocócico no que diz respeito à resistência aos antibióticos são impressionantes. A expressão PorB também diminuiu a susceptibilidade meningocócica à doxiciclina, uma das terapias recomendadas para a multiplicação de N. gonorrhoeae resistente. De forma problemática, isto sugere que a pressão selectiva pode levar ao aparecimento de variantes de porb gonocócicas com reduzida susceptibilidade à doxiciclina. Apesar de registarmos apenas duas vezes diferenças que são improváveis em isolamento para levar a falhas de tratamento, a sinergia da variação PorB com outras mutações tem o potencial de expandir o espectro de resistência meningocócica e gonocócica. Não encontramos nenhuma evidência de um papel para PorA no trânsito antimicrobiano através da membrana externa.