UHPLC și UPLC sunt ambele tehnici de cromatografie lichidă utilizate pentru a separa diferitele componente găsite în amestecuri. Comentariu: premisa așa cum sa afirmat implică o diferență între UHPLC și UPLC atunci când, de fapt, acestea sunt aceleași tehnici. În 2004, Waters a lansat tehnica cunoscută sub numele de UltraPerformance LC (UPLC) bazată pe particule poroase sub 2 microni și a marcat acronimul UPLC. Pe măsură ce vânzătorii au intrat pe piață cu instrumente similare, UHPLC a fost inventat ca o modalitate de a se referi la instrumente similare cu UPLC, deoarece UPLC este o marcă comercială Waters. Cei doi termeni sunt înțeleși ca fiind sinonimi. Tehnologia care permite aici atât pentru instrumentele UHPLC, cât și pentru instrumentele UPLC este sub particule de 2 microni; majoritatea metodelor HPLC sunt dezvoltate pe particule cu dimensiuni cuprinse între 2,5 – 5 microni. Particulele mai mici sub 2 microni necesită o presiune mai mare pentru a lucra cu sistemele UHPLC sau UPLC trebuie să fie capabile să funcționeze peste 6.000 PSI, care este de obicei limita superioară a HPLC convenționale.

un amestec este o substanță care conține două sau mai multe elemente chimice și compuși, care nu au fost legați împreună în timpul unei reacții chimice. Comentariu:” cromatografia lichidă ” este separarea componentelor solubilizate împreună într-un lichid. Prin utilizarea unei coloane, componentele din amestec interacționează/difuzează peste coloană și în porii sau suprafața sa într-o măsură mai mare sau mai mică și devin separate. Deoarece particulele sub 2 microni sunt atât de mici, calea de difuzie dintre analiții de probă și faza staționară este mai scurtă și eficiența este mai mare. Particulele de miez Solid, care sunt acum în creștere, sunt încapsulate de o suprafață de particule mici, astfel încât difuzia calea este mai mică și eficiența este mai mare, dar depinde în continuare de „grosimea) stratului de particule din jurul „miezului”solid. HPLC, uhplc și predecesorul UPLC, s-au bazat pe pompe, care au trecut un lichid sub presiune care conține un amestec de probă prin materiale absorbante. Comentariu: pompele sunt necesare atât cu UHPLC, cât și cu UPLC. Când împingeți un lichid prin coloana ambalată, este necesară o pompă care produce contrapresiune. În unele cazuri, faza mobilă este presurizată înainte de a intra în contact cu coloana analitică, dar eșantionul este introdus ulterior.

în ultimii 6 ani, UHPLC și UPLC au ajuns în prim plan. Atât UHPLC, cât și UPLC permit oamenilor de știință să se lupte cu particule mai mici mai repede decât era posibil anterior, cu toate acestea, există diferențe cheie între cele două sisteme. Comentariu: în loc să se confrunte cu particule mai mici, UHPLC și UPLC permit oamenilor de știință să se confrunte cu mai multe provocări analitice mai repede decât era posibil anterior.

ce este UPLC?

UPLC (ultra performance liquid chromatography) sisteme au fost introduse pentru prima dată în 2004. Prin aproape dublarea presiunii totale de funcționare (la 15.000 psi) pentru a obține debite mai rapide, dezvoltatorii UPLC au reușit să obțină separări LC de rezoluție egală sau mai bună în intervale de timp mult mai scurte. Comentariu: mai degrabă decât „dublarea presiunii generale de funcționare pentru a obține debite mai rapide” este mai bine să spunem … „pentru a profita de particulele de 2 microni sunt necesare presiuni mai mari.”ID-ul tipic al unei coloane UPLC este 2.1 mm și, în general, debitele sunt mai mici decât HPLC, dar datorită creșterii eficienței, explicată mai sus, timpul total de separare este redus. În ceea ce privește eficiența, precizia și productivitatea, aceasta a fost o veste bună pentru laboratoarele din întreaga lume. UPLC este o variantă a HPLC, folosind și coloane și pompe. Comentariu: fie că vorbim despre HPLC, UPLC sau UHPLC, fiecare dintre aceste tehnici utilizează coloane și pompe.

ce este UHPLC?

în schimb, uhplc (ultra high performance liquid chromatography) funcționează în intervalul de 20.000 psi. Comentariu: acest lucru nu este pur și simplu adevărat. Unele sisteme UHPLC pot merge atât de sus, dar nu toate. În general, instrumentele UPLC sunt sisteme cu dispersie mai mică, cu volum mai mic (coloană suplimentară) care pot funcționa la presiuni mai mari.? Spre deosebire de UPLC, numele nu este marcă înregistrată și se poate referi la un număr de sisteme ale producătorilor. Sistemele UHPLC au fost proiectate având în vedere un volum redus de locuit. Comentariu: volumul de locuit este un termen care se referă la separări de gradient; volumul suplimentar al coloanei și dispersia sunt termeni mai buni de utilizat. Uplc-urile au volume mai mici de locuit, dar acest lucru se datorează faptului că volumul extra-coloană este minimizat. A avea un volum redus nu este singurul atribut de performanță al unui sistem UPLC. Acestea oferă rate mai mari de eficiență decât sistemele UPLC, deși sunt, de asemenea, predispuse la blocaj. Comentariu: nu sunt sigur de unde vine acest lucru. Dacă o probă nu este pregătită corect, atunci este posibil să înfundați o coloană uhplc sau uplc sub 2 microni. Este coloana care poate fi înfundată, nu sistemul. Articolul UHPLC sau core-Shell, care este câștigătorul? discută avantajele sistemelor relative în detaliu.

pentru ce sunt utilizate sistemele UPLC și UHPLC?

UPLC și UHPLC au fost utilizate în mai multe scopuri, inclusiv juridice, farmaceutice și medicale. Sistemele sunt, de asemenea, instrumente importante în domeniile cercetării și fabricării. Fără HPLC, UPLC și UHPLC, oamenii de știință s-ar lupta să detecteze prezența medicamentelor care îmbunătățesc performanța în probele furnizate de sportivi, în timp ce detectarea nivelurilor de vitamina D în serul de sânge ar dura mult mai mult decât în prezent. Comentariu: viteza, rezoluția și sensibilitatea instrumentelor UHPLC și UPLC le fac ideale pentru utilizarea cu MS. Accesibilitatea și ușurința de utilizare a unei noi generații de instrumente MS face ca LC-MS să fie mai practic pentru mai multe laboratoare.

aceste tehnologii reprezintă, prin urmare, un important pas înainte. Firește, tehnologii și mai rapide și mai precise sunt dezvoltate pe măsură ce citiți acest articol. Cu toate acestea, pentru moment, uplc și uhplc sisteme rămân la marginea de taiere de mult efort științific.

în ultima vreme, progresele atât în instrumentația analitică, cât și în chimia fazei staționare i-au determinat pe cromatografi să reevalueze sistemele și metodele pe care le folosesc zilnic. Articolul optimizarea coloanelor Uhplc Core-Shell pentru îmbunătățirea separărilor de proteine și Peptide tratează acest lucru mai detaliat.

*modificări în roșu furnizate de
Waters Corporation
34 Maple Street
Milford
MA 01757
Statele Unite ale Americii