TEXT

oreionul este o infecție virală acută, sistemică, transmisibilă caracterizată prin umflarea uneia sau a ambelor glande parotide, adesea însoțită de complicații mai grave, cum ar fi meningita, pancreatita sau orhita. Virusul oreionului (MuV), un virus ARN cu catenă negativă nesegmentată din familia Paramyxoviridae, codifică nouă proteine din șapte unități de transcripție. Ordinea genei este 3′-N-V/P/I-M-F-SH-HN-l – 5′, reprezentând nucleo-(n), v/fosfo-/I (V/P/I), matrice (M), fuziune (F), hidrofob mic (SH), hemaglutinin-neuraminidază (HN) și, respectiv, gene proteice mari (L) (28, 29). Funcțiile proteinelor virale au fost bine descrise în literatura de specialitate (9, 37). Pe scurt, proteinele N, P și L sunt localizate în virion și sunt responsabile pentru transcrierea și replicarea genomului. Proteina M, localizată și intern, este implicată în asamblarea și înmugurirea virionului și poate regla, de asemenea, transcrierea și replicarea genomului. Glicoproteinele F și HN, prezente pe suprafața exterioară a învelișului viral, sunt responsabile pentru atașarea virus-la-celulă și fuziunea virus-la-celulă și celulă-la-celulă. Proteinele SH și V sunt proteine accesorii nestructurale implicate în evaziunea răspunsului antiviral gazdă. Rolul proteinei I în ciclul de viață al virusului nu este cunoscut.

înainte de implementarea programelor de imunizare împotriva oreionului, mai mult de 90% din majoritatea populațiilor aveau dovezi serologice de expunere la MuV până la vârsta de 15 ani (11, 44). În decurs de un deceniu de la implementarea vaccinării împotriva oreionului din 1967 în Statele Unite, incidența bolii a scăzut de la mai mult de 100 de cazuri raportate la 100.000 de populație la mai puțin de 10 cazuri la 100.000 (12). Până în 2001, boala a fost aproape eliminată, cu mai puțin de 0,1 cazuri la 100.000 (43). Succes Similar în controlul oreionului a fost obținut în alte țări (32, 50, 58); Cu toate acestea, în ultimii 6 ani, oreionul a făcut o renaștere la nivel global, inclusiv în Statele Unite, care au cunoscut recent cel mai mare focar de atunci 1987 (5, 7, 13, 14, 19, 42, 49, 52, 53, 62). În timp ce oreionul a fost istoric o boală a copilăriei, aceste focare au implicat predominant adulți tineri, aproape toți având antecedente de vaccinare în timpul copilăriei, majoritatea cu programul recomandat de două doze. Deși aceste date sugerează scăderea imunității, s-a postulat, de asemenea, că diferențele antigenice dintre vaccin și tulpinile focarului pot permite evadarea vaccinului (20, 45). Într-adevăr, virusurile izolate din focarele recente se grupează în grupări de genotipuri distincte de cele ale tulpinilor de vaccin utilizate. Cu puține excepții, tulpinile de genotip G au fost izolate din cazurile din emisfera vestică (27), genotipul J și F din regiunea Asia-Pacific (5, 16) și genotipul H din Orientul Mijlociu (3, 33), în timp ce vaccinurile împotriva oreionului utilizate în aceste țări conțin predominant vaccinuri pe bază de genotip a Jeryl Lynn (JL) și într-o măsură mai mică vaccinul genotip B Urabe-AM9 și vaccinul genotip Leningrad-Zagreb care urmează să fie atribuit.pentru a investiga în mod cuprinzător posibilitatea ca anumite tulpini de virus oreion să fie insensibile la anticorpii induși de vaccin, am căutat mai întâi să identificăm țintele proteice virale ale anticorpului neutralizant și apoi să construim arbori filogenetici pe baza secvențelor de aminoacizi ale acestor proteine. Un membru reprezentativ al virusului din fiecare grup ar fi apoi utilizat în testele de neutralizare a reducerii plăcii (PRN) cu seruri (furnizate cu amabilitate de Merck și Co.) obținut de la 96 de copii cu vârsta cuprinsă între 4 și 6 ani la 6 săptămâni de la primirea unei a doua doze de vaccin împotriva rujeolei, oreionului și rubeolei (MMR) care conține tulpina de virus JL oreion (51).

deși este clar că proteina MuV HN este o țintă a anticorpului neutralizant (21, 35, 40, 48, 59), capacitatea de neutralizare a virusului anticorpilor direcționați împotriva altor proteine MuV nu a fost investigată în mod adecvat. Aici, tehnicile de genetică inversă au fost utilizate pentru a construi plasmide ADNc de lungime întreagă care codifică diferite combinații de proteine virale N, V/P/I, L, F și HN derivate din două tulpini MUV disparate genetic, genotipul a virusul vaccinului JL și genotipul H 88-1961 (denumit aici 88) virus de tip sălbatic (4). Anticorpii direcționați împotriva proteinei SH neesențiale nu au fost detectați în serurile umane; astfel, este puțin probabil ca astfel de anticorpi, dacă există, să joace un rol important în neutralizarea virusului mediat de anticorpi. Prin urmare, proteina SH a fost exclusă din această analiză. Rolul proteinei M nu a fost evaluat. Structura genetică a celor opt virusuri recombinante utilizate pentru analiză este prezentată în Fig. 1.

un subset din cele 96 de probe serice (n = 10, preselectate pentru intervalul de titru) au fost testate pentru capacitatea lor relativă de neutralizare împotriva acestor opt virusuri recombinante în testele PRN efectuate conform descrierii anterioare (54). Rezultatele sunt prezentate în Fig. 2. Toate comparațiile au fost efectuate folosind date transformate în jurnal și testul T al elevului (0,05). Așa cum era de așteptat, înlocuirea genei JL HN cu cea a 88 sau invers a dat titruri medii geometrice (GMT) care au fost semnificativ diferite de cele ale virusurilor parentale (toate valorile P au fost <0.001), confirmând proteina HN ca țintă majoră a anticorpului neutralizant. În schimb, înlocuirea genei JL F cu cea a 88 sau invers a produs GMT-uri care nu diferă statistic de cele măsurate împotriva virusurilor parentale (valoarea P de 0,06 sau, respectiv, 0,385), sugerând că gena Muv F nu joacă un rol semnificativ în răspunsul anticorpilor neutralizanți. Acest lucru este în concordanță cu constatările altor persoane care nu au reușit să realizeze neutralizarea virusului cu anticorpi anti-MuV F protein (47, 60, 63), deși un grup a raportat că serul de la hamsteri infectați cu virusul vaccinia care exprimă proteina MUV F a fost capabil de neutralizarea virusului in vitro (34). Nu s-a observat niciun efect asupra neutralizării cu înlocuirea genelor N, V/P/I și l, o constatare care poate nu a fost surprinzătoare , având în vedere inaccesibilitatea probabilă a acestor proteine exprimate intern la anticorpi. Cu toate acestea, neutralizarea cu anticorpi specifici pentru proteinele exprimate intern a fost raportată pentru alte virusuri (22, 39, 41). Deși analiza Western blot a evidențiat diferențe în conținutul de proteine virale între diferitele virusuri, nivelurile de exprimare a proteinelor nu s-au corelat cu susceptibilitatea la neutralizare (datele nu sunt prezentate).

pe baza demonstrației proteinei HN ca actor major în susceptibilitatea virusului la neutralizarea mediată de anticorpi, toate tulpinile unice de virus oreion pentru care secvența de aminoacizi HN de lungime completă a fost disponibilă în bazele de date NCBI (http://www.ncbi.nlm.nih.gov) au fost utilizate pentru a construi un arbore filogenetic folosind programul freeware MEGA V3.1 (36) folosind metoda grupului pereche neponderat cu mijloace aritmetice (UPGMA) (26). Arborele rezultat a prezentat șapte clustere distincte, etichetate arbitrar ca grupuri de la 1 la 7 (Fig. 3). Gruparea similară a virusurilor a fost realizată atunci când analiza a fost repetată utilizând secvența nucleotidică a genei SH (datele nu sunt prezentate). A fost selectat un virus din fiecare grup HN, cu excepția grupului 1, pentru care au fost aleși doi viruși pentru a permite testarea atât a tulpinii omoloage de vaccin (JL), cât și a unui virus diferit din grupul 1. Nu au fost disponibili viruși care reprezintă grupul 3. Astfel, au fost testate în total șapte Muv-uri.

GMT-urile celor 96 de probe serice testate împotriva celor 7 tulpini de MuV sunt prezentate în Fig. 4. Toate serurile au neutralizat toate virusurile. Nu este surprinzător că cele mai mari titruri au fost măsurate împotriva JL (agentul imunizant). Nu s-au observat diferențe semnificative statistic între Anti-Jl și anti-Enders/Usa45 GMTs (233 față de 195, p = 0,166, testul Mann-Whitney rank sum), în concordanță cu cele două virusuri aparținând aceluiași grup filogenetic HN. În schimb, titrurile anti-JL au fost semnificativ diferite de cele măsurate față de celelalte cinci virusuri (toate au avut valori P de <0,001, Mann-Whitney rank sum test). Astfel, deși am găsit dovezi clare ale diferențelor antigenice dintre tulpinile virusului oreionului, faptul că toate serurile au neutralizat toate virusurile susține ideea că virusul oreionului este serologic monotipic și argumentează împotriva evoluției tulpinilor exotice capabile să scape de imunitatea indusă de vaccinul JL. Cu toate acestea, serurile testate aici au fost obținute de la indivizi la 6 săptămâni după vaccinare, un moment în care titrurile sunt relativ ridicate (8), în timp ce numeroase studii au descoperit că nivelurile de anticorpi specifici MuV scad semnificativ odată cu timpul postvaccinare (24, 25, 38, 54). Aceasta a fost asociată cu scăderea eficacității vaccinului (17, 31, 57) și cu creșterea riscului de contractare a bolii (10, 19, 61). Astfel, este posibil ca până la adolescență (când nivelurile de anticorpi au scăzut) astfel de diferențe antigenice să fie semnificative.

De notat, imunitatea celulelor T nu a fost evaluată în acest studiu; astfel, nu putem exclude posibilitatea ca anumite tulpini de MuV să fie capabile să scape de răspunsurile celulelor T induse de vaccin. Având în vedere dovezile noastre privind imunitatea eficientă a celulelor B La scurt timp după vaccinare, capacitatea de a scăpa de răspunsurile celulelor T induse de vaccin ar putea să nu fie semnificativă pe termen scurt, dar ar putea agrava dramatic problemele cauzate de scăderea imunității celulelor B pe măsură ce intervalul dintre vaccinare și expunerea ulterioară crește. De asemenea, trebuie recunoscut faptul că măsurătorile anticorpilor neutralizanți virali in vitro pot să nu fie pe deplin predictive ale activității imunologice in vivo, având în vedere că numeroase procese care apar în gazdă nu sunt reflectate în testele utilizate pentru măsurarea viabilității virusului in vitro.

este important să subliniem faptul că apariția focarelor la populațiile vaccinate nu este o problemă unică pentru tulpina vaccinului JL, având în vedere că focarele au apărut și la populațiile cu antecedente de vaccinare cu tulpinile Urabe AM9 și Leningrad-Zagreb (3, 15, 18, 33, 46). Astfel, dezvoltarea de noi tulpini de vaccin împotriva oreionului, așa cum au sugerat unii, nu este o soluție probabilă a problemei. Mai degrabă, revaccinarea în timpul adolescenței pentru a combate scăderea imunității ar putea fi cea mai eficientă măsură, așa cum sugerează experiența cu recruții militari care au fost scutiți de implicarea în reapariția oreionului în Statele Unite în 2006, în ciuda apartenenței la aceeași grupă de vârstă și a domiciliului în medii de contact strâns cu densitate mare, condiții care nu sunt diferite de cele din campusurile universitare în care cea mai mare parte a focarelor a avut loc în 2006. Motivul probabil pentru aceasta este că, în 1991, armata a început administrarea de rutină a vaccinului MMR recruților, fără a ține cont de statutul de vaccinare anterioară. Această politică a fost modificată în 1995 și apoi din nou în 2006, dar efectul final a fost că o proporție semnificativă de recruți au primit probabil o doză de vaccin care conține oreion la intrarea în armată (6).