rolul celulelor Vero în cercetarea vaccinurilor virale
autor: AcceGen R&echipa D celulele Vero sunt recunoscute de Organizația Mondială a Sănătății (OMS) și Farmacopeea chineză în producerea vaccinurilor. Celulele Vero, cunoscute și sub numele de celule africane de rinichi de maimuță verde, au fost izolate oficial de rinichii Africani de maimuță verde de către savanții Japonezi Yasumura Y și Kawakita Y în 1962. A fost prima celulă dependentă de atașamentul aneuploidiei utilizată în producerea de produse biologice umane și stabilirea liniilor celulare și a băncii celulare de generații diferite în același timp.
vaccinurile virale au fost utilizate pe scară largă în prevenirea multor boli, inclusiv rabia, gripa și variola. Cu toate acestea, vaccinurile nu sunt încă accesibile pentru populațiile vulnerabile din zonele endemice, costul vaccinului și nevoia imensă la nivel mondial sunt principalele obstacole pentru utilizarea echitabilă și globală a vaccinurilor virale umane.
celulele Vero pot fi aplicate la producția de vaccinuri variază de la vaccinurile cu rotavirus viu la vaccinurile gripale vii atenuate până la dezvoltarea vaccinurilor cu virus întreg inactivat. Celulele Vero nu pot exprima interferon proteic antiviral din cauza defectelor lor genetice inerente. Prin urmare, susceptibilitatea largă a celulelor Vero a promovat dezvoltarea producției de vaccinuri folosind celulele Vero ca substrat.
celulele Vero prezintă următoarele avantaje în comparație cu liniile celulare primare și diploide pentru producerea de produse biologice. În primul rând, Banca de celule este ușor de stabilit și conservat, în același timp poate fi pasată continuu cu o rată de creștere rapidă. În al doilea rând, celulele Vero au trăsături genetice stabile și o probabilitate scăzută de malignitate. În al treilea rând, celulele Vero sunt sensibile la o varietate de viruși și au titruri mari de virus. În cele din urmă, celulele Vero ar putea fi extrem de rezistente la diferite condiții culturale, iar cerințele nu sunt ridicate pentru a putea crește bine pe suprafața microcarrierului, ceea ce demonstrează că celulele Vero au o valoare semnificativă în dezvoltarea unei serii de vaccinuri virale.
cum se cultivă celulele vero aderente
creșterea celulelor Vero este dependentă de ancorare, iar celulele Vero pot prolifera numai atunci când sunt prevăzute cu o suprafață adecvată. Celulele vero aderente au fost cultivate separat în MEM, Mediu 199, și DMEM suplimentat cu 10% FBS sub o cultură de 5% CO2 și 37 de culturi de la 37. Cercetatorii au descoperit ca celulele Vero, cea mai mare concentrație de celule a ajuns la 25.6 1.1 104 celule/cm2 în grupul DMEM + FBS, care a crescut cu 50.1% comparativ cu grupul mem+FBS și 89.6% din grupul M199+FBS (figure1) .
figure1. Compararea creșterii celulelor Vero în diferite medii de cultură (n=5)
În plus, mai multe celule moarte sferoidale au fost găsite în grupul mediu m199 + FBS. În concluzie, grupul mediu DMEM + FBS este mai potrivit pentru creșterea celulelor Vero și a fost selectat în cele din urmă pentru cercetări ulterioare (figuer2).
figure2. Imagini de creștere a celulelor Vero în diferite medii în ziua 4, (1) MEM+FBS, (2) M199+FBS, (3) DMEM+FBS
FBS poate furniza celulelor Vero substanțele necesare pentru cultura de atașament in vitro, cum ar fi factorii de atașament, factorii de creștere și hormonii, care ar putea oferi un mediu stabil in vitro și ar putea promova creșterea celulelor cu densitate mare.
cu toate acestea, serul este un amestec complex de elemente, iar componentele sale nu sunt complet clare. Prin urmare, utilizarea serului în tehnologia culturii celulare are multe dezavantaje, ceea ce a sporit instabilitatea procesului de producție a vaccinului și dificultatea controlului calității vaccinului. Cercetătorii au început să utilizeze medii fără ser de celule animale pentru a înlocui mediile serice tradiționale bovine, care au devenit o tendință esențială de dezvoltare pentru producția de vaccinuri virale.
adaptarea celulelor vero aderente la creșterea suspensiei în IPT-AFM
aplicare: Utilizarea unei noi suspensii Vero cell line combinată cu IPT-AFM, un mediu dezvoltat intern fără componente animale, va contribui foarte mult la reducerea costului vaccinului.
celulele Vero aderente au fost inițial crescute fie în mediu esențial minim (mem) suplimentat cu 10% FBS, fie IPT-AFM (un mediu fără componente animale dezvoltat intern). Cultura celulară a fost utilizată ca un balon de shake deflector la o densitate de însămânțare de 7 104 celule / cm2, apoi celulele au fost infectate la un MOI de 0,1, fără a trece la un schimb mediu.
pentru cultura suspensiei, cinci medii comerciale fără ser / definite chimic au fost testate lângă IPT-AFM. Celulele Vero au folosit trei metode diferite (figura 3), apoi celulele au fost monitorizate zilnic printre parametrii cinetici. Pentru evaluarea viabilității, celulele au fost colorate cu albastru de trypan (0,2% (m/v) în soluție salină tamponată cu fosfat (PBS) . Rezultatele lor arată că celulele vero suspendate au crescut cel mai bine în a treia cultură, așa cum se arată în figura4, iar celulele Vero au reușit să crească în suspensie în IPT-AFM.
figure3. Adaptarea celulelor vero aderente la cultura de suspensie conform celor trei protocoale.
figure4. Creșterea celulelor Vero adaptate culturii de suspensie în flacoane de agitare în conformitate cu 3 protocoale diferite (date din 12 pasaje).
concluzie
domeniul principal de aplicare al tehnologiei mediului de cultură celulară Vero a fost dezvoltarea și producerea vaccinurilor virale. Realizarea vaccinurilor folosind celulele Vero ca matrice a îmbunătățit siguranța și controlabilitatea calității produsului.
în viitor, celulele Vero pot fi utilizate în dezvoltarea și aplicarea vaccinurilor actuale împotriva coronavirusului (COVID-19). Virusul COVID-19 poate învăța din experiența dezvoltării vaccinurilor împotriva virusului rabiei folosind celule Vero, ceea ce a făcut ca celulele Vero să transforme starea aderentă în cultură de suspensie (cultură fără ser). Eficiența infecției și titrul de virus au fost detectate după transfectarea cu virusuri COVID-19.
AcceGen Vero Cell Line
AcceGen culturi și oferă African Green monkey rinichi cell line — Vero, Vero (AC-free), Vero 76. Pentru informații mai detaliate, vă rugăm să vizitați site-ul nostru sau de contact [email protected]
1. Yasumura Y KY: studii privind SV40 în cultura țesuturilor-pas preliminar pentru cercetarea cancerului in vitro. Nihon rinsho 1963, 21: 1201-1215.
2. Barrett PN, Terpening SJ, zăpadă D, Cobb RR, Kistner O: Tehnologia vero cell pentru dezvoltarea rapidă a vaccinurilor virale întregi inactivate pentru bolile virale emergente. Revizuirea expertă a vaccinurilor 2017, 16(9):883-894.
3. Khaled Trabelsi MBZ, h Electicla Kallel: purificarea virusului rabiei produs în celulele Vero cultivate în mediu liber seric. vaccin 2019.
4. Shen CF, Guilbault C, Li X, Elahi SM, Ansorge S, Kamen a, Gilbert R: dezvoltarea tehnologiei procesului de cultură celulară Vero adaptată suspensiei pentru producerea vaccinurilor virale. Vaccin 2019, 37 (47):6996-7002.
5. Orr-Burks N, Murray J, Wu W, Kirkwood CD, Todd KV, Jones L, Bakre a, Wang H, Jiang B, Tripp RA: celulele vero editate genetic ca substraturi ale vaccinului împotriva rotavirusului. Vaccin: X 2019, 3: 100045.
6. Yang J, Guertin P, Jia G, LV Z, Yang H, Ju D: cultura microcarrierului pe scară largă a celulelor HEK293T și a celulelor Vero în Bioreactoare de unică folosință. AMB Express 2019, 9 (1): 70.
7. Samia Rourou MBZ, h Electicla Kallel: adaptarea celulelor Vero la creșterea suspensiei pentru producția de virus rabic în diferite medii libere de ser. Vaccin 2019.