Vad är Scaffold proteiner?

Proteinställningar är medlemmar i signalkaskaden nedströms cellytreceptorer. Ställningsproteiner hjälper till att vidarebefordra meddelandet mellan cellmembranet och kärnan snabbare. De gör detta genom att fungera som en dockningsplats för flera proteinpartners i kaskaden så att de kan vara nära varandra. Denna närhet skär ner den tid som krävs för ett protein i kaskaden för att hitta sin partner. Vissa proteinställningar förblir lossade tills ett meddelande från en aktiverad membranreceptor når dem, varefter de dockas av flera proteiner i kaskaden. Andra proteinställningar dockas av proteiner i kaskaden redan innan en aktiverad membranreceptor skickar ett meddelande till dem, vilket ökar effektiviteten i vilken meddelandet vidarebefordras från receptor till kärna.

GPCRs och Ställningsproteiner

G-proteinkopplade receptorer (GPCRs) är en stor klass av cellytproteiner som vidarebefordrar extracellulära signaler till kärnan. Ett exempel på en GPCR är den adrenerga receptorn som känner av hormonet adrenalin. En gång aktiverad av en ligand vid den yttre cellytan aktiverar GPCR: er sina besläktade G-proteiner som finns på det inre cellmembranet. De aktiverade G-proteinerna glider sedan längs insidan av cellmembranet för att aktivera en kaskad av proteiner och enzymer som i sin tur förstärker det ursprungliga meddelandet mottaget av GPCR. Ställningsproteiner är viktiga nav för information nedströms aktiverade GPCR. Ställningsproteiner rekryterar nedströms medlemmar av en signalkaskad till det inre cellmembranet mycket snabbt, eller i förväg, vilket gör det effektivt för meddelandet att flytta från GPCR till cytosol.

Aktiveringstillstånd för Signalkaskaden

komplexiteten hos intracellulär signalering är att proteinerna i en signalkaskad har varierande aktivitetstillstånd (dvs. av, delvis aktiv, fullt aktiv). Dessa tillstånd beror på konformationsförändringar som härrör från interaktioner med andra proteiner. De beror också på närvaron eller frånvaron av delar, såsom fosfatgrupper, ubiquitingrupper och kalciumjoner. Aktiveringstillståndet för ett signalprotein används ofta som en indikator på huruvida en viss väg har aktiverats. Till exempel tolkas fosforylerad MEK eller ERK ofta som att representera aktivering av en intracellulär signalväg nedströms en GPCR. Vidare kan dessa signalproteiner ha flera ställen för fosforylering, olika kombinationer av vilka påverkar nivån på proteinets aktivitet eller halveringstid. Proteiner som MEK och ERK är kända för att binda nära varandra på ställningsproteiner. Förmågan ställningsproteiner att binda MEK och ERK regleras också i termer av ställningens aktiveringstillstånd, som förändras efter post-translationell modifiering genom tillsats av kemiska delar.

plocka rätt epitoper för korrekt Information

den ovannämnda komplexiteten hos intracellulär signalering är just därför att plocka rätt antikroppar är avgörande när forskare försöker exakt bestämma tillståndet för en cell som svar på extracellulära stimuli. Varje aktiv konformation av ett protein-eller fosforyleringsställe kan fungera som en annan epitop som kan bindas av en antikropp. Således kan antikroppar som är utformade för att detektera närvaron eller frånvaron av en kemisk del på ett signalprotein ge forskare en tydlig bild av vilken väg som har aktiverats och i vilken utsträckning. Fosforylerade epitoper är ofta mål för immunoblotting och in situ immunolokaliseringsanalyser. Eftersom ett protein kan ha flera fosforyleringsställen, som var och en påverkar proteinet annorlunda, förutom flera platser för delar som ubiquitination, att välja rätt epitoper för att upptäcka är en fruktbar men icke – trivial uppgift.

flera epitoper, oavsett om de är på samma protein eller olika proteiner, kan detekteras samtidigt eller sekventiellt på samma fläck eller samma celler. Det är därför viktigt att rätt värdart för primära och sekundära antikroppar beaktas med eftertanke. Enstaka domänantikroppar är också användbara för dessa experiment, vilket ökar mångsidigheten hos kombinationer av antikroppar som kan användas i samma analys.

både monoklonala och polyklonala antikroppar är användbara vid detektering av tillståndet för intracellulära signalkaskader. Vår guide för val av antikroppar gör det enkelt att välja rätt kombination av antikroppar. Det tar hänsyn till exemplararter, värdarter, önskad nivå av specificitet, och korsreaktivitet oro, bland andra faktorer. Antikroppsvalsguiden leder dig till de bästa alternativen för enstaka antikroppar eller de som du kommer att använda i flera applikationer. Den rätta kombinationen av antikroppar riktade mot strategiska epitoper kommer att ge klarhet i tillståndet för varje intracellulär signalkaskad.