en mycket effektiv metod för genöverföring till däggdjurscell är genom infektion med retrovirala vektorer. Effektiviteten av retroviral infektion förbättras signifikant, 100 till 1000 gånger i vissa celler, genom att inkludera polybren under infektionen. Polybren med en DMSO-chock används också för att förmedla DNA-överföring till en mängd olika celltyper, såsom CHO, kycklingembryofibroblaster, NINH-3T3 och myeloida celler.
protokoll: Retroviral infektion
rekombinanta retrovirala bestånd bereds genom att tillsätta 5 ml tillväxtmedium med 5% serum till ett nära sammanflytande monolager av transfekterade retrovirala förpackningsceller i en 100 mm platta. Efter 24 timmar avlägsnas mediet och filtreras genom ett 0,45 um-filter.
celler som ska infekteras med detta rekombinanta retrovirala lager pläteras vid 500 000 celler per 100 mm platta i 10 ml komplett medium.
24 timmar senare, ta bort tillväxtmediet från cellerna. Infektera celler med 2 ml av den virala supernatanten (eller en utspädning av virusbeståndet i 2 ml) i närvaro av 5UG till 10ug polybren per ml (slutlig koncentration). Inkubera celler i 3 till 6 timmar vid 37 msk C.
tillsätt 8 ml komplett medium. Tre dagar efter infektion, dela cellerna 1:5 i urvalsmedium.

Toyoshima, K. och Vogt, P. K., 1969. Virologi. 38: 414-426
Coelen, J. R., Jose, D. G. och maj, J. T. 1983. Båge. Virol. 75: 307-311
protokoll: transfektion
Plattceller vid ungefär 50% sammanflöde i komplett tillväxtmedium.
18 till 24 timmar efter plätering, Förbered DNA-Medium-Polybrenlösning, omedelbart före användning enligt följande:
Obs: varje komponent måste tillsättas i rätt ordning.
1: A: komplett tillväxtmedium (2mls för en 60 mm platta och 3mls för
en 100 mm platta) värmdes till 37 kcal C.
2: a: Plasmid DNA, 10ng till 10ug. Blanda försiktigt.
3: Polybren till en slutlig koncentration av 5ug till 10ug per ml. Blanda försiktigt
ta bort medium från plattan och tillsätt DNA-Medium-Polybrenlösning till celler. Inkubera celler vid 37 C i 6 till 20 timmar med enstaka mild gungning ungefär varje 1.5 timmar under de första 6 timmarna. ta bort DNA-Medium-Polybrenlösning och lägg försiktigt över celler med DMSO shock solution (15% DMSO i 1x HBSS: Specialmediakatalog #S-051-D) 3 ml per 60 mm skål och 4 ml per 100 mm platta. Vagga skålen manuellt i 10 sekunder för att jämnt fördela lösningen och inkubera sedan cellerna i exakt 4 minuter vid 37 C.
ta omedelbart bort DMSO-chocklösningen och skölj försiktigt cellerna två gånger med komplett tillväxtmedium, 5 ml per tvätt per 60 mm skål, 10 ml per tvätt per 100 mm skål
Lägg till komplett tillväxtmedium i cellerna.
för stabila transformanter, ta bort tillväxtmediet och dela cellerna 1:5 i urvalsmedium.
för övergående uttryck, ta bort tillväxtmediet och tillsätt färskt tillväxtmedium. Skörda celler och / eller medium efter 24 till 72 timmar.

Chaney, W. G. et al., 1986. Somatisk Cell och Molekylär Genetik. Vol. 12, nr 23,
237-244.
Aubin, R. J. et al. 1988. Somatisk Cell och Molekylär Genetik. Vol. 14, nr 2, 155-167.
Chisholm, O. et al., 1998. Nukleinsyror Forskning. Vol. 16, nr 5, 2352
reagens tillförs filtreras genom 0,2 um membran och hydratiseras med steril H20.