författare: AcceGen R&D-Team

ursprunget till Vero-celler

Vero-celler erkänns av Världshälsoorganisationen (WHO) och kinesisk farmakopoeia vid framställning av vacciner. Vero-celler, även kända som afrikanska gröna apa-njurceller, isolerades officiellt från afrikanska gröna apa-njurar av japanska forskare Yasumura Y och Kawakita Y 1962. Det var den första aneuploidibindningsberoende cellen som användes för att producera humana biologiska produkter och etablera cellinjer och cellbank av olika generationer samtidigt.

förhållandet mellan Vero-celler och virala vacciner

virala vacciner har använts i stor utsträckning för att förebygga många sjukdomar, inklusive rabies, influensa och smittkoppor. Vacciner är dock fortfarande inte överkomliga för utsatta populationer i endemiska områden, kostnaden för vaccinet och det enorma behovet över hela världen är de viktigaste hindren för rättvis och global användning av humana virusvacciner.

Vero-cellerna kan appliceras på vaccinproduktionsintervall från levande rotavirusvacciner till levande försvagade influensavacciner till utveckling av inaktiverade hela virusvacciner. Vero-celler kan inte uttrycka antiviralt proteininterferon på grund av deras inneboende genetiska defekter. Därför har den breda känsligheten hos Vero-celler främjat utvecklingen av vaccinproduktion med Vero-celler som substrat.

Vero-celler har följande fördelar jämfört med de primära och diploida cellinjerna för att producera biologiska produkter. För det första är cellbanken lätt att etablera och bevara, samtidigt som den kontinuerligt kan passeras med en snabb tillväxttakt. För det andra har Vero-celler stabila genetiska egenskaper och låg sannolikhet för malignitet. För det tredje är Vero-celler känsliga för en mängd olika virus och har höga virustitrar. Slutligen kan Vero-celler vara mycket resistenta mot olika kulturella förhållanden, och kraven är inte höga att det kan växa bra på mikrobärarens yta, vilket visar att Vero-celler har betydande värde i utvecklingen av en serie virala vacciner.

hur man odlar vidhäftande Vero-celler

tillväxten av Vero-celler är förankringsberoende, och Vero-celler kan bara proliferera när de är försedda med en lämplig yta. Vidhäftande Vero-celler odlades separat i MEM, Medium 199, och DMEM kompletterades med 10% FBS under en 5% CO2 och 37-kulturer. Forskarna fann att Vero-celler, den högsta cellkoncentrationen nådde 25,6 1,1 104-celler/cm2 i DMEM + FBS-gruppen, vilket ökade 50,1% jämfört med MEM+FBS-gruppen och 89,6% av m199+FBS-gruppen (figure1) .

figur1. Jämförelse av Verocelltillväxt i olika odlingsmedier (n = 5)

dessutom hittades fler sfäroidala döda celler i m199 + FBS-mediumgruppen. Sammanfattningsvis är DMEM + FBS-medelgruppen mer lämplig för tillväxten av Vero-celler och valdes slutligen för efterföljande forskning (figuer2).

figur2. Vero – celltillväxtbilder i olika medier på Dag 4, (1) MEM+FBS, (2) M199+FBS, (3) DMEM+FBS

FBS kan ge Vero-celler de nödvändiga ämnena för fästkultur in vitro, såsom fästfaktorer, tillväxtfaktorer och hormoner, vilket kan ge en stabil miljö in vitro och främja celltillväxt med hög densitet.

serumet är emellertid en komplex blandning av element, och dess komponenter är inte helt tydliga. Därför har användningen av serum i cellodlingsteknik många nackdelar, vilket ökade instabiliteten i vaccinproduktionsprocessen och svårigheten med vaccinkvalitetskontroll. Forskare har börjat använda djurcellserumfria medier för att ersätta traditionella nötkreaturserummedier, vilket har blivit en viktig utvecklingstrend för virusvaccinproduktion.

anpassning av vidhäftande Vero-celler till suspensionstillväxt i ipt-AFM

applikation: Användningen av en ny suspension Vero-cellinje kombinerad med IPT-AFM, ett internt utvecklat djurkomponentfritt medium kommer starkt att bidra till att minska vaccinkostnaden.

vidhäftande Vero-celler odlades initialt antingen i minsta väsentliga Medium (MEM) kompletterat med 10% FBS eller IPT-AFM (ett internt utvecklat djurkomponentfritt medium). Cellodling användes som en baffelskakkolv vid en sådddensitet av 7 104 celler / cm2, sedan infekterades celler vid en MOI av 0,1, utan att gå vidare till ett medium utbyte.

för suspensionskultur testades fem kommersiella serumfria/kemiskt definierade medier bredvid IPT-AFM. Vero-celler använde tre olika metoder (figure3), sedan övervakades celler dagligen bland kinetiska parametrar. För viabilitetsbedömning färgades celler med trypanblått (0,2% (w/v) i fosfatbuffrad saltlösning (PBS) . Deras resultat visar att suspenderade Vero-celler växte bäst i den tredje kulturen, som visas i figure4, och Vero-celler kunde växa i suspension i IPT-AFM.

figur3. Anpassning av vidhäftande Vero-celler till suspensionskultur enligt de tre protokollen.

figur4. Tillväxt av Vero-celler anpassade till suspensionskultur i skakflaskor enligt 3 olika protokoll (data från 12 passager).

slutsats

det huvudsakliga användningsområdet för Vero – cellodlingsmediumteknologi var utveckling och produktion av virala vacciner. Att göra vacciner med Vero-celler som en matris har förbättrat säkerheten och styrbarheten för produktkvaliteten.

i framtiden kan Vero-celler användas vid utveckling och tillämpning av nuvarande koronavirusvacciner (COVID-19). COVID-19-virus kan lära av erfarenheten av att utveckla rabiesvirusvacciner med Vero-celler, vilket gjorde att Vero-celler omvandlar det vidhäftande tillståndet till suspensionskultur (serumfri kultur). Infektionseffektiviteten och virustitern upptäcktes efter transfektion med COVID-19-virus.

AcceGen Vero cellinje

AcceGen kulturer och ger den afrikanska gröna apan njure cellinje-Vero, Vero (AC-fri), Vero 76. För mer detaljerad information, besök vår hemsida eller kontakta [email protected]

1. Yasumura Y KY: studier på SV40 i vävnadsodling-preliminärt steg för cancerforskning in vitro. Nihon rinsho 1963, 21: 1201-1215.

2. Barrett PN, Terpening SJ, snö D, Cobb RR, Kistner O: Vero cell-teknik för snabb utveckling av inaktiverade hela virusvacciner för nya virussjukdomar. Expertrecension av vacciner 2017, 16 (9):883-894.

3. Khaled Trabelsi MBZ, h Tuberkula Kallel: rening av rabiesvirus producerat i Vero-celler odlade i serumfritt medium. vaccin 2019.

4. Shen CF, Guilbault C, Li X, Elahi SM, Ansorge S, Kamen A, Gilbert R: utveckling av suspension Anpassad Vero cellodling processteknik för produktion av virala vacciner. Vaccin 2019, 37 (47):6996-7002.

5. Orr-Burks N, Murray J, Wu W, Kirkwood CD, Todd KV, Jones L, Bakre A, Wang H, Jiang B, Tripp RA: Genredigerade vero-celler som rotavirusvaccinsubstrat. Vaccin: X 2019, 3: 100045.

6. Yang J, Guertin P, Jia G, Lv Z, Yang H, Ju D: storskalig mikrobärarkultur av HEK293T-celler och Vero-celler i engångsbioreaktorer. AMB Express 2019, 9 (1):70.

7. Samia Rourou MBZ, h Tuberkulo Kallel: anpassning av Vero-celler till suspensionstillväxt för rabiesvirusproduktion i olika serumfria medier. Vaccin 2019.