UHPLC en UPLC zijn beide vloeistofchromatografietechnieken die worden gebruikt om de verschillende componenten in mengsels te scheiden. Commentaar: het uitgangspunt zoals vermeld impliceert een verschil tussen UHPLC en UPLC terwijl het in feite dezelfde technieken zijn. In 2004 lanceerde Waters de techniek UltraPerformance LC (UPLC) op basis van sub 2-micron poreuze deeltjes en een handelsmerk van het acroniem UPLC. Toen leveranciers op de markt kwamen met soortgelijke instrumenten werd UHPLC bedacht als een manier om te verwijzen naar instrumenten die vergelijkbaar zijn met UPLC omdat UPLC een handelsmerk van Waters is. De twee termen worden als synoniem beschouwd. De technologie voor zowel UHPLC-als UPLC-instrumenten is sub 2-micron deeltjes; de meeste HPLC-methoden worden ontwikkeld op deeltjes tussen 2,5 – 5 micron in grootte. De kleinere sub 2-micron deeltjes vereisen een hogere druk om te werken met zo UHPLC of UPLC systemen moeten kunnen werken boven 6.000 PSI die typisch de bovengrens van conventionele hplcs is.

een mengsel is een stof die bestaat uit twee of meer chemische elementen en verbindingen die tijdens een chemische reactie niet aan elkaar zijn gebonden. Toelichting:” vloeistofchromatografie ” is de scheiding van samen in een vloeistof opgeloste bestanddelen. Door een kolom te gebruiken interageren de componenten in het mengsel over de kolom en in zijn poriën of oppervlak in meer of mindere mate en worden gescheiden. Aangezien sub 2 microndeeltjes zo klein zijn, is de diffusieweg tussen de steekproefanalytes en de stationaire fase korter en is de efficiëntie hoger. Vaste kerndeeltjes, die nu op de stijging, worden ingekapseld door een oppervlak van kleine deeltjes dus diffusie het pad is nog kleiner en de efficiëntie is hoger, maar nog steeds afhankelijk van de “dikte) van de laag van deeltjes rond de vaste “kern”. hplc, UHPLC en de voorganger van UPLC vertrouwden op pompen die een vloeistof onder druk met een monstermengsel door absorberende materialen passeerden. Opmerking: pompen zijn vereist met zowel UHPLC als UPLC. Wanneer u een vloeistof door de verpakte kolom duwt, is een pomp vereist die tegendruk produceert. In sommige gevallen wordt de mobiele fase onder druk gezet alvorens in contact te komen met de analytische kolom, maar de steekproef wordt later geïntroduceerd.

gedurende de afgelopen zes jaar zijn UHPLC en UPLC op de voorgrond getreden. Zowel UHPLC als UPLC stellen wetenschappers in staat om sneller met kleinere deeltjes te worstelen dan voorheen mogelijk was, maar er bestaan belangrijke verschillen tussen de twee systemen. Commentaar: in plaats van te worstelen met kleinere deeltjes, UHPLC en UPLC stellen wetenschappers in staat om sneller te worstelen met meer analytische uitdagingen dan voorheen mogelijk was.

Wat is UPLC?

UPLC (ultra performance liquid chromatography) systemen werden voor het eerst geïntroduceerd in 2004. Door de totale bedrijfsdruk bijna te verdubbelen (tot 15.000 psi) om snellere debietsnelheden te verkrijgen, konden UPLC-ontwikkelaars gelijke of betere resolutie LC-scheidingen bereiken in veel kortere termijnen. Opmerking: in plaats van “de totale bedrijfsdruk te verdubbelen om snellere debietsnelheden te verkrijgen” is het beter om te zeggen … “om te profiteren van 2 micron deeltjes hogere drukken zijn vereist.”De typische ID van een UPLC kolom is 2.1 mm en in het algemeen debieten zijn lager dan HPLC, maar als gevolg van de efficiëntieverhoging, hierboven uitgelegd, de totale scheidingstijd wordt verminderd. In termen van efficiëntie, nauwkeurigheid en productiviteit was dit goed nieuws voor laboratoria over de hele wereld. UPLC is een variant van HPLC, ook met behulp van kolommen en pompen. Commentaar: of we het nu hebben over HPLC, UPLC of UHPLC, elk van deze technieken maakt gebruik van kolommen en pompen.

Wat is UHPLC?

daarentegen werkt UHPLC (ultra high performance liquid chromatography) in het bereik van 20.000 psi. Commentaar: Dit is gewoon niet waar. Sommige UHPLC-systemen kunnen zo hoog gaan, maar niet alle. In het algemeen zijn UPLC-instrumenten systemen met een lagere dispersie, een lager volume (extra kolom) die bij hogere druk kunnen werken.? In tegenstelling tot UPLC, de naam is niet handelsmerk, en kan verwijzen naar een aantal fabrikanten’ systemen. UHPLC-systemen zijn ontworpen met een laag dwell-volume in het achterhoofd. Commentaar: Dwell volume is een term die verwijst naar gradiëntscheidingen; extra kolomvolume en dispersie zijn betere termen om te gebruiken. UPLCs hebben lagere dwell volumes, maar dit is omdat de extra-kolom volume is geminimaliseerd. Het hebben van een laag volume is niet het enige performance attribuut van een UPLC systeem. Ze bieden een hogere efficiëntie dan UPLC-systemen, maar zijn ook vatbaar voor verstopping. Commentaar: niet zeker waar dit vandaan komt. Als een monster niet goed is voorbereid, dan is het mogelijk om een sub 2-micron UHPLC of UPLC kolom te verstoppen. Het is de kolom die verstopt kan raken, niet het systeem. Het artikel UHPLC of Core-Shell, Wat is de winnaar? bespreekt de voordelen van de relatieve systemen in meer detail.

waarvoor worden UPLC-en UHPLC-systemen gebruikt?

UPLC en UHPLC zijn gebruikt voor vele doeleinden, waaronder juridische, farmaceutische en medische. De systemen zijn ook belangrijke instrumenten op het gebied van onderzoek en fabricage. Zonder HPLC, UPLC en UHPLC, zouden wetenschappers worstelen om de aanwezigheid van prestatiebevorderende drugs in de steekproeven te ontdekken die door atleten worden verstrekt, terwijl het ontdekken van vitamine D-niveaus in bloedserum veel langer zou duren dan het vandaag doet. Opmerking: De snelheid, resolutie en gevoeligheid van UHPLC-en UPLC-instrumenten maken ze bij uitstek geschikt voor gebruik met MS. De betaalbaarheid en het gebruiksgemak van een nieuwe generatie MS-instrumenten maken LC-MS praktischer voor meer laboratoria.

deze technologieën vormen daarom een belangrijke stap voorwaarts. Natuurlijk, nog sneller, nauwkeuriger technologieën worden ontwikkeld als je dit artikel leest. Voorlopig blijven UPLC-en UHPLC-systemen echter op het snijvlak van veel wetenschappelijke inspanningen.

de laatste tijd hebben de vooruitgang in zowel de analytische instrumentatie als de stationaire fase chemie chromatografen ertoe gebracht de systemen en methoden die zij dagelijks gebruiken opnieuw te beoordelen. Het artikel Optimising Core-Shell UHPLC Columns for Improving Protein and Peptide Separations behandelt dit in meer detail.

*veranderingen in rood verstrekt door
Waters Corporation
34 Maple Street
Milford
MA 01757
USA