Autor: AcceGen R&D Tým

Původ Vero Buňky

Vero buňky jsou uznány Světovou zdravotnickou Organizací (WHO) a Čínské Lékopisu při výrobě vakcín. Vero buňky, také známé jako africké zelené opičí ledvinové buňky, byly oficiálně izolovány z afrických zelených opičích ledvin japonskými učenci Yasumura Y a Kawakita Y v roce 1962. To byl první aneuploidie připojení-závislé na použité buňky v produkci lidských biologických produktů a stanovení buněčné linie a buněčné banky z různých generací zároveň.

vztah mezi Vero buňkami a virovými vakcínami

virové vakcíny byly široce používány při prevenci mnoha nemocí, včetně vztekliny, chřipky a neštovic. Vakcíny však stále nejsou dostupné pro zranitelné populace v endemických oblastech, náklady na vakcínu a obrovská potřeba po celém světě jsou hlavními překážkami spravedlivého a globálního používání lidských virových vakcín.

Vero buňky mohou být aplikovány na výrobu vakcín od živých rotavirových vakcín přes živé atenuované vakcíny proti chřipce až po vývoj inaktivovaných celých virových vakcín. Vero buňky nemohou exprimovat antivirový proteinový interferon kvůli svým vlastním genetickým defektům. Proto široká citlivost Vero buněk podpořila vývoj produkce vakcíny pomocí vero buněk jako substrátu.

Vero buňky mají následující výhody ve srovnání s primární a diploidní buněčné linie pro výrobu biologických produktů. Za prvé, buněčná banka je snadno zřízena a zachována, současně může být nepřetržitě pasážována rychlým tempem růstu. Za druhé, Vero buňky mají stabilní genetické vlastnosti a nízkou pravděpodobnost malignity. Zatřetí, buňky Vero jsou citlivé na různé viry a mají vysoké titry viru. Konečně, Vero buňky by mohly mimořádně odolné na různé kulturní podmínky a požadavky nejsou vysoké, že to může dobře rostou na povrchu microcarrier, což dokazuje, že Vero buňky mají významnou hodnotu v rozvoji série virových vakcín.

jak kultivovat adherentní Vero buňky

růst Vero buněk je závislý na ukotvení a Vero buňky mohou proliferovat pouze tehdy, pokud jsou opatřeny vhodným povrchem. Adherentní Vero buňky byly kultivovány odděleně v MEM, Medium 199 a DMEM doplněné 10% FBS pod 5% CO2 a 37℃ kulturami. Vědci zjistili, že Vero buňky, nejvyšší koncentraci buněk dosáhl 25,6 ± 1.1 × 104 buněk/cm2 v DMEM + FBS group, která zvýšila 50.1% ve srovnání s MEM+FBS skupiny a 89.6% M199+FBS skupiny (1) .

1. Srovnání Vero růst buněk v různých kultivačních médiích (n=5)

Kromě toho, více tvárné mrtvé buňky byly nalezeny v M199 + FBS střední skupiny. Závěrem lze říci, že střední skupina DMEM + FBS je vhodnější pro růst Vero buněk a byla nakonec vybrána pro následný výzkum (figuer2).

Obrázek 2. Vero růst buněk obrázky v různých médiích na den 4, (1) MEM+FBS, (2) M199+FBS, (3) DMEM+FBS

FBS může poskytnout Vero buněk potřebné látky pro připevnění kultury in vitro, jako přílohu faktory, růstové faktory a hormony, které by mohlo poskytnout stabilní prostředí in vitro, a podporu high-density růst buněk.

sérum je však složitá směs prvků a jeho složky nejsou zcela jasné. Použití séra v technologii buněčné kultury má proto mnoho nevýhod, což zvyšuje nestabilitu procesu výroby vakcíny a obtížnost kontroly kvality vakcíny. Vědci začali používat média bez séra živočišných buněk k nahrazení tradičních bovinních sérových médií, která se stala základním vývojovým trendem pro výrobu virových vakcín.

adaptace adherentních Vero buněk na růst suspenze v IPT-AFM

aplikace: Použití nové suspenzní buněčné linie Vero v kombinaci s IPT-AFM, interně vyvinutým médiem bez živočišných složek, velmi přispěje ke snížení nákladů na vakcínu.

Přilnavý Vero Buňky byly původně pěstovány buď v Minimální Esenciální Médium (MEM) s přídavkem 10% FBS nebo IPT-AFM (in-house vyvinuté zvíře složka-volné medium). Buněčná kultura byla použita jako baňka na tlumení při hustotě setí 7×104 buněk / cm2, poté byly buňky infikovány při MOI 0,1, aniž by došlo k výměně média.

pro suspenzní kulturu bylo testováno pět komerčních médií bez séra/chemicky definovaných vedle IPT-AFM. Vero buňky používaly tři různé metody (obrázek 3), Poté byly buňky denně monitorovány mezi kinetickými parametry. Pro posouzení životaschopnosti byly buňky obarveny trypanovou modří (0,2% hmotnostních) ve fyziologickém roztoku pufrovaném fosfáty (PBS) . Jejich výsledky ukazují, že suspendované Vero buňky rostly nejlépe ve třetí kultuře, jak je znázorněno na obrázku4, a Vero buňky byly schopny růst v suspenzi v IPT-AFM.

Obrázek 3. Adaptace adherentních buněk Vero na suspenzní kulturu podle tří protokolů.

Figure4. Růst Vero buňky přizpůsobené k zavěšení kultury v shake baněk podle 3 různých protokolů (údaje z 12 průchodů).

závěr

hlavní oblastí použití technologie buněčného kultivačního média Vero byl vývoj a výroba virových vakcín. Výroba vakcín s použitím Vero buněk jako matrice zlepšila bezpečnost a ovladatelnost kvality produktu.

v budoucnu mohou být buňky Vero použity při vývoji a aplikaci současných vakcín proti koronaviru (COVID-19). COVID-19 virus může učit ze zkušeností vývoje vakcíny proti viru vztekliny pomocí Vero buňky, což Vero buňky transformovat přichycený do stavu suspenze kultury (kultury bez séra). Účinnost infekce a titr viru byly detekovány po transfekci viry COVID-19.

AcceGen Vero buněčná linie

AcceGen kultur a poskytuje africkou zelenou opičí ledvinovou buněčnou linii-Vero, Vero(AC-free), Vero 76. Pro podrobnější informace navštivte naše webové stránky nebo kontaktujte [email protected]

1. Yasumura Y KY: studie o SV40 v tkáňové kultuře-předběžný krok pro výzkum rakoviny in vitro. Nihon rinsho 1963, 21: 1201-1215.

2. Barrett PN, Terpening SJ, Snow D, Cobb RR, Kistner O: Technologie Vero cell pro rychlý vývoj inaktivovaných celých virových vakcín pro vznikající virová onemocnění. Znalecký posudek vakcín 2017, 16 (9): 883-894.

3. Khaled Trabelsi MBZ, Héla Kallel: purifikace viru vztekliny produkovaného v buňkách Vero pěstovaných v médiu bez séra. vakcína 2019.

4. Shen CF, Guilbault C, Li X, Elahi SM, Ansorge S, Kamen a, Gilbert R: vývoj suspenze přizpůsobené technologie procesu kultivace buněk Vero pro výrobu virových vakcín. Vakcína 2019, 37 (47): 6996-7002.

5. Orr-Burks N, Murray J, Wu W, Kirkwood CD, Todd KV, Jones L, Bakre A, Wang H, Jiang B, Tripp RA: genově upravené vero buňky jako substráty vakcíny proti rotavirům. X 2019, 3: 100045.

6. Yang J, Guertin P, Jia G, Lv Z, Yang H, Ju D: velkokapacitní mikronosná kultura buněk HEK293T a buněk Vero v bioreaktorech na jedno použití. Ambassador 2019, 9 (1): 70.

7. Samia Rourou MBZ, Héla Kallel: adaptace buněk Vero na růst suspenze pro produkci viru vztekliny v různých médiích bez séra. Vakcína 2019.