vysoce efektivní metody přenosu genů do savčích buněk je přes infekci s retrovirální vektory. Účinnost retrovirové infekce je významně zvýšena, 100 až 1000krát v některých buňkách, zahrnutím polybrenu během infekce. Polybren s DMSO šokem se také používá k zprostředkování přenosu DNA do různých typů buněk, jako jsou cho, fibroblasty kuřecích embryí, NINH-3T3 a myeloidní buňky.
protokol: Retrovirální Infekce
Rekombinantní retrovirální zásoby jsou připraveny přidáním 5mls růstu na médiu s 5% sérem na téměř splývající monovrstva z transfektovaly retrovirových obalových buněk v 100 mm desky. Po 24 hodinách je médium odstraněno a filtrováno přes 0,45 um filtr.
Buňky, které mají být napaden s tímto rekombinantní retrovirální skladem jsou pozlacené 500 000 buněk na 100mm deska v 10mls úplné střední.
o 24 hodin později odstraňte růstové médium z buněk. Infikovat buňky s 2mls virového supernatantu (nebo ředění viru skladem do 2mls) v přítomnosti 5ug na 10ug z polybrene na ml (finální koncentrace). Inkubujte buňky po dobu 3 až 6 hodin při 37°C.
přidejte 8 ml kompletního média. Tři dny po infekci rozdělte buňky 1: 5 na výběrové médium.

Tojošima, K. a Vogt, P. K., 1969. Virologie. 38:414-426
Coelen, J. R., Jose, D. G. a Možná, J. T. 1983. Oblouk. Virol. 75: 307-311
protokol: transfekce
deskové buňky při přibližně 50% soutoku v úplném růstovém médiu.
18 až 24 hodin po pokovení připravte roztok DNA-Medium-Polybren bezprostředně před použitím následujícím způsobem:
Poznámka: každá složka musí být přidána ve správném pořadí.
1: Kompletní růstové médium (2mls pro 60mm talíř a 3mls
100mm deska) se zahřeje na 37°C.
2.: Plasmid DNA, 10ng na 10ug. Jemně promíchejte.
3.: Polybren na konečnou koncentraci 5ug až 10ug na ml. Jemně promíchejte
odstraňte médium z desky a přidejte do buněk roztok DNA-Medium-Polybren. Inkubujte buňky při 37°C po dobu 6 až 20 hodin s občasným jemným houpáním přibližně každých 1.5 hodin po dobu prvních 6 hodin.
Odebrat DNA-Střední-Polybrene roztoku a jemně překrytí buněk s DMSO šok řešení (15% DMSO v 1X HBSS: Speciální Média katalog #S-051-D) 3mls na 60mm jídlo a 4mls za 100mm deska. Ručně rock misky po dobu 10 sekund, aby rovnoměrně distribuovat řešení, a pak inkubovat buňky přesně 4 minuty při 37°C.
Okamžitě odstranit DMSO šok roztoku a jemně opláchněte buňky dvakrát s kompletní růstové médium, 5mls za praní na 60 mm pokrm, 10mls za praní za 100mm misky.
Přidat kompletní růstové médium pro buňky.
u stabilních transformátorů odstraňte růstové médium a rozdělte buňky 1: 5 na výběrové médium.
pro přechodnou expresi odstraňte růstové médium a přidejte čerstvé růstové médium. Sklizeň buněk a / nebo média po 24 až 72 hodinách.

Chaney, W. G. et al., 1986. Somatická Buněčná a molekulární genetika. Svazek. 12, č. 23,
237-244.
Aubin, R. J. et al. 1988. Somatická Buněčná a molekulární genetika. Svazek. 14, č. 2, 155-167.
Chisholm, O. et al., 1998. Výzkum Nukleových Kyselin. Svazek. 16, č. 5, 2352
činidlo se dodává filtrováno přes 0,2 um membrány a hydratováno sterilním H20.