Hvad er Stilladsproteiner?

Protein stilladser er medlemmer af signalkaskaden nedstrøms for celleoverfladereceptorer. Stilladsproteiner hjælper med at videresende meddelelsen mellem cellemembranen og kernen hurtigere. De gør dette ved at tjene som et dockingssted for flere proteinpartnere i kaskaden, så de kan være i nærheden af hinanden. Denne nærhed reducerer den tid, der kræves for et protein i kaskaden for at finde sin partner. Nogle protein stilladser forbliver losset, indtil en meddelelse fra en aktiveret membranreceptor når dem, hvorefter de er docket af flere proteiner i kaskaden. Andre protein stilladser er docket af proteiner i kaskaden, selv før en aktiveret membranreceptor sender en besked til dem, hvilket øger effektiviteten, hvor meddelelsen videresendes fra receptor til kerne.

GPCR’ er og Stilladsproteiner

G-proteinkoblede receptorer (GPCR ‘ er) er en stor klasse af celleoverfladeproteiner, der videresender ekstracellulære signaler til kernen. Et eksempel på en GPCR er den LARP-adrenerge receptor, der registrerer hormonet adrenalin. Når de er aktiveret af en ligand ved den ydre celleoverflade, aktiverer GPCR ‘ er deres beslægtede G-proteiner, der ligger på den indre cellemembran. De aktiverede g-proteiner glider derefter langs indersiden af cellemembranen for at aktivere en kaskade af proteiner og proteiner, der igen forstærker den oprindelige meddelelse modtaget af GPCR. Stilladsproteiner er vigtige knudepunkter for information nedstrøms for aktiverede GPCR ‘ er. Stilladsproteiner rekrutterer nedstrøms medlemmer af en signalkaskade til den indre cellemembran meget hurtigt eller på forhånd, hvilket gør det effektivt for meddelelsen at flytte fra GPCR til cytosol.

Aktiveringstilstande for Signalkaskaden

kompleksiteten af intracellulær signalering er, at proteinerne i en signalkaskade har forskellige aktivitetstilstande (dvs.slukket, delvist aktiv, fuldt aktiv). Disse tilstande afhænger af konformationsændringer, der skyldes interaktioner med andre proteiner. De afhænger også af tilstedeværelsen eller fraværet af dele, såsom fosfatgrupper, allestedsnærværende grupper og calciumioner. Aktiveringstilstanden for et signalprotein bruges ofte som en indikator for, om en bestemt vej er blevet aktiveret. For eksempel fortolkes phosphoryleret MEK eller erk ofte som repræsenterer aktivering af en intracellulær signalvej nedstrøms for en GPCR. Desuden kan disse signalproteiner have flere steder med phosphorylering, hvor forskellige kombinationer påvirker niveauet af proteinets aktivitet eller halveringstid. Proteiner som MEK og Erk er kendt for at binde nær hinanden på stilladsproteiner. Evnen stilladsproteiner til at binde MEK og Erk reguleres også med hensyn til stilladsets aktiveringstilstand, som ændres efter posttranslationel modifikation ved tilsætning af kemiske dele.

valg af de rigtige epitoper for nøjagtig Information

den førnævnte kompleksitet af intracellulær signalering er netop, hvorfor det er afgørende at vælge de rigtige antistoffer, når forskere søger nøjagtigt at bestemme tilstanden af en celle som reaktion på ekstracellulære stimuli. Hver aktiv konformation af et protein-eller phosphoryleringssted kan tjene som en anden epitop, der kan bindes af et antistof. Antistoffer, der er designet til at detektere tilstedeværelsen eller fraværet af en kemisk del på et signalprotein, kan således give forskere et klart billede af, hvilken vej der er blevet aktiveret, og i hvilket omfang. Fosforylerede epitoper er ofte mål for immunoblotting og In situ immunolokaliseringsassays. Da et protein kan have flere phosphoryleringssteder, som hver især påvirker proteinet forskelligt, ud over flere steder for dele såsom allestedsnærværende, at vælge de rigtige epitoper til at opdage er en frugtbar – men ikke – triviel-opgave.

flere epitoper, hvad enten det er på det samme protein eller forskellige proteiner, kan detekteres samtidigt eller sekventielt på den samme plet eller samme celler. Det er således vigtigt, at de rigtige værtsarter for primære og sekundære antistoffer overvejes med omtanke. Enkeltdomæneantistoffer er også nyttige til disse eksperimenter, hvilket øger alsidigheden af kombinationer af antistoffer, der kan anvendes i samme assay.

både monoklonale og polyklonale antistoffer er nyttige til påvisning af tilstanden af intracellulære signalkaskader. Vores guide til valg af antistoffer gør det let at vælge den rigtige kombination af antistoffer. Det tager blandt andet hensyn til prøvearten, værtsarten, det ønskede niveau af specificitet og krydsreaktivitet. Guide til valg af antistof fører dig til de bedste muligheder for antistoffer til et formål eller dem, du vil bruge i flere applikationer. Den rigtige kombination af antistoffer målrettet mod strategiske epitoper vil bringe klarhed til tilstanden af enhver intracellulær signalkaskade.