en meget effektiv metode til genoverførsel til pattedyrscelle er gennem infektion med retrovirale vektorer. Effektiviteten af retroviral infektion forbedres signifikant, 100 til 1.000 gange i nogle celler ved at inkludere polybrene under infektionen. Polybren med et DMSO-chok bruges også til at formidle DNA-overførsel til en række forskellige celletyper, såsom CHO, kyllingembryo fibroblaster, NINH-3T3 og myeloide celler.
protokol: Retroviral infektion
rekombinante retrovirale lagre fremstilles ved at tilsætte 5 ml vækstmedium med 5% serum til et næsten sammenflydende monolag af transficerede retrovirale emballageceller i en 100 mm plade. Efter 24 timer fjernes mediet og filtreres gennem et 0,45 um filter.
celler, der skal inficeres med denne rekombinante retrovirale bestand, er belagt med 500.000 celler pr.100 mm plade i 10 ml komplet medium.
24 timer senere fjernes vækstmediet fra cellerne. Inficer celler med 2 ml af den virale supernatant (eller en fortynding af virusbestanden i 2 ml) i nærvær af 5UG til 10ug polybren pr.ml (endelig koncentration). Inkuber celler i 3 til 6 timer ved 37 liter C.
Tilføj 8 ml komplet medium. Tre dage efter infektion opdeles cellerne 1:5 i selektionsmedium.

Toyoshima, K. og Vogt, P. K., 1969. Virologi. 38: 414-426
Coelen, J. R., Jose, D. G. og maj, J. T. 1983. Bue. Virol. 75: 307-311
protokol: transfektion
pladeceller ved cirka 50% sammenløb i komplet vækstmedium.
18 Til 24 timer efter plettering, klargør DNA-medium-Polybren-opløsningen umiddelbart inden brug som følger:
bemærk: hver komponent skal tilsættes i den rigtige rækkefølge.
1st: komplet vækstmedium (2mls for en 60mm plade og 3mls for
en 100mm plade) opvarmet til 37 liter C.
2nd: Plasmid DNA, 10ng til 10ug. Bland forsigtigt.
3.: Polybren til en endelig koncentration på 5ug til 10ug pr. Bland forsigtigt
Fjern medium fra pladen og tilsæt DNA-medium-Polybrenopløsning til celler. Inkuber celler ved 37 liter C til 6 til 20 timer med lejlighedsvis blid rocking ca.hver 1.5 timer i de første 6 timer.
fjern DNA-medium-Polybren opløsning og forsigtigt overlejre celler med DMSO shock solution (15% DMSO i 1 HBSS: Special Media catalog #S-051-d) 3mls pr 60mm skål og 4mls pr 100mm plade. Manuelt rock skålen i 10 sekunder for at fordele opløsningen jævnt, og inkuber derefter cellerne i nøjagtigt 4 minutter ved 37 liter C.
fjern straks DMSO-chokopløsningen og Skyl forsigtigt cellerne to gange med komplet vækstmedium, 5 ml pr.vask pr. 60 mm skål, 10 ml pr. vask pr. 100 mm skål
Tilføj komplet vækstmedium til cellerne.
For stabile transformanter skal du fjerne vækstmediet og opdele cellerne 1:5 i selektionsmedium.
for forbigående ekspression, fjern vækstmediet og tilføj frisk vækstmedium. Høst celler og / eller medium efter 24 Til 72 timer.

Chaney, et al., 1986. Somatisk celle og Molekylær Genetik. Vol. 12, nr. 23,
237-244.
Aubin, R. J. et al. 1988. Somatisk celle og Molekylær Genetik. Vol. 14, nr. 2, 155-167.
Chisholm, O. et al., 1998. Nukleinsyrer Forskning. Vol. 16, No. 5, 2352
reagens tilføres filtreret gennem 0,2 um membraner og hydreret med steril H20.