forfatter: AcceGen R&D Team

oprindelsen af VERO-celler

Vero-celler anerkendes af Verdenssundhedsorganisationen (hvem) og kinesisk Pharmacopoeia til fremstilling af vacciner. Vero-celler, også kendt som afrikanske grønne abenyreceller, blev officielt isoleret fra afrikanske grønne abenyrer af japanske lærde Yasumura Y og Kaakita Y i 1962. Det var den første aneuploidi-tilknytningsafhængige celle, der blev brugt til produktion af humane biologiske produkter og etablering af cellelinjer og cellebank af forskellige generationer på samme tid.

forholdet mellem Vero-celler og virale vacciner

virale vacciner er blevet anvendt i vid udstrækning til forebyggelse af mange sygdomme, herunder rabies, influensa og kopper. Vacciner er dog stadig ikke overkommelige for sårbare befolkninger i endemiske områder, omkostningerne ved vaccinen og det enorme behov over hele verden er de største forhindringer for retfærdig og global anvendelse af humane virale vacciner.Vero-cellerne kan anvendes til vaccineproduktion fra levende rotavirusvacciner til levende svækkede vacciner til udvikling af inaktiverede helvirusvacciner. Vero-celler kan ikke udtrykke antiviralt proteininterferon på grund af deres iboende genetiske defekter. Derfor har den brede modtagelighed af Vero-celler fremmet udviklingen af vaccineproduktion ved hjælp af Vero-celler som substrat.

Vero-celler har følgende fordele sammenlignet med de primære og diploide cellelinjer til fremstilling af biologiske produkter. For det første er cellebanken let at etablere og bevare, samtidig med at den kontinuerligt kan passeres med en hurtig vækstrate. For det andet har Vero-celler stabile genetiske træk og en lav sandsynlighed for malignitet. For det tredje er Vero-celler følsomme over for en række vira og har høje virustitere. Endelig kunne Vero-celler meget modstandsdygtige over for forskellige kulturelle forhold, og kravene er ikke høje, at de kan vokse godt på overfladen af mikrobæreren, hvilket beviser, at Vero-celler har betydelig værdi i udviklingen af en række virale vacciner.

Sådan dyrkes klæbende Vero-celler

væksten af Vero-celler er forankringsafhængig, og Vero-celler kan kun proliferere, når de er forsynet med en passende overflade. Adhærente Vero-celler blev dyrket separat i MEM, Medium 199 og DMEM suppleret med 10% FBS under en 5% CO2 og 37 liter kulturer. Forskerne fandt ud af, at Vero-celler, den højeste cellekoncentration nåede 25,6 liter 1,1 liter 104 celler/cm2 i dmem + FBS-gruppen, hvilket steg 50,1% sammenlignet med mem+FBS-gruppen og 89,6% af m199+FBS-gruppen (figur1) .

figur1. Sammenligning af Vero-cellevækst i forskellige kulturmedier (n=5)

Desuden blev der fundet flere sfæriske døde celler i m199 + FBS-mediumgruppen. Afslutningsvis er dmem + FBS-mediumgruppen mere egnet til vækst af Vero-celler og blev i sidste ende udvalgt til efterfølgende forskning (figuer2).

figur2. Vero-cellevækstbilleder i forskellige medier på dag 4, (1) MEM+FBS, (2) M199+FBS, (3) DMEM+FBS

FBS kan give Vero-celler de nødvendige stoffer til vedhæftningskultur in vitro, såsom vedhæftningsfaktorer, vækstfaktorer og hormoner, som kunne give et stabilt miljø in vitro og fremme cellevækst med høj densitet.

serumet er imidlertid en kompleks blanding af elementer, og dets komponenter er ikke helt klare. Derfor har brugen af serum i cellekulturteknologi mange ulemper, hvilket øgede ustabiliteten i vaccineproduktionsprocessen og vanskeligheden ved vaccinekvalitetskontrol. Forskere er begyndt at bruge dyrecelle serumfrie medier til at erstatte traditionelle bovint serummedier, hvilket er blevet en væsentlig udviklingstendens for produktion af viral vaccine.

tilpasning af klæbende Vero-celler til suspensionsvækst i IPT-AFM

anvendelse: Brugen af en ny suspension Vero cellelinie kombineret med IPT-AFM, et internt udviklet dyrekomponentfrit medium vil i høj grad bidrage til at reducere vaccineomkostningerne.vedhængende Vero-celler blev oprindeligt dyrket enten i Minimum Essential Medium (MEM) suppleret med 10% FBS eller IPT-AFM (et internt udviklet dyrekomponentfrit medium). Cellekultur blev anvendt som en baffelskakekolbe ved en såningstæthed på 7 liter 104 celler / cm2, derefter blev celler inficeret ved en MOI på 0,1 uden at gå videre til en medium udveksling.

til suspensionskultur blev fem kommercielle serumfrie/kemisk definerede medier testet ved siden af IPT-AFM. Vero-celler anvendte tre forskellige metoder (figur3), derefter blev celler overvåget dagligt blandt kinetiske parametre. Til levedygtighedsvurdering blev celler farvet med trypanblåt (0,2% (vægt/v) i phosphatbufret saltvand (PBS) . Deres resultater viser, at suspenderede Vero-celler voksede bedst i den tredje kultur, som vist i figure4, og Vero-celler var i stand til at vokse i suspension i IPT-AFM.

figur3. Tilpasning af adhærente Vero-celler til suspensionskultur i henhold til de tre protokoller.

figur4. Vækst af Vero-celler tilpasset suspensionskultur i rystekolber i henhold til 3 forskellige protokoller (data fra 12 passager).

konklusion

det vigtigste anvendelsesområde for Vero-cellekulturmedieteknologi var udvikling og produktion af virale vacciner. Fremstilling af vacciner ved hjælp af Vero-celler som Matriks har forbedret sikkerheden og kontrollerbarheden af produktkvaliteten.

i fremtiden kan Vero-celler anvendes til udvikling og anvendelse af nuværende coronavirusvacciner (COVID-19). COVID-19-virus kan lære af erfaringerne med at udvikle rabiesvirusvacciner ved hjælp af Vero-celler, hvilket fik Vero-celler til at omdanne den klæbende tilstand til suspensionskultur (serumfri kultur). Infektionseffektiviteten og virustiteren blev påvist efter transfektion med COVID-19-vira.

AcceGen Vero cellelinje

AcceGen kulturer og giver den afrikanske grønne abe nyrecellelinje — Vero, Vero (AC-fri), Vero 76. For mere detaljeret information, besøg vores hjemmeside eller kontakt [email protected]

1. Yasumura Y KY: undersøgelser af SV40 i vævskultur-indledende trin til kræftforskning in vitro. Nihon rinsho 1963, 21: 1201-1215.

2. Barrett PN, Terpening SJ, sne D, Cobb RR, Kistner O: Vero-celleteknologi til hurtig udvikling af inaktiverede helvirusvacciner til nye virussygdomme. Ekspertanmeldelse af vacciner 2017, 16 (9):883-894.

3. Khaled Trabelsi, H. C. Kallel: oprensning af rabiesvirus produceret i Vero-celler dyrket i serumfrit medium. vaccine 2019.

4. Shen CF, Guilbault C, Li, Elahi SM, Ansorge S, Kamen a, Gilbert R: udvikling af suspension tilpasset Vero cellekultur procesteknologi til produktion af virale vacciner. Vaccine 2019, 37 (47): 6996-7002.

5. Det er en af de mest almindelige typer af vacciner, der bruges til at bekæmpe rotavirus. Vaccine: 2019, 3: 100045.

6. Yang J, Guertin P, Jia G, LV å, Yang H, Ju D: storskala mikrobærerkultur af HEK293T-celler og Vero-celler i engangsbioreaktorer. AMB udtrykke 2019, 9 (1): 70.

7. Tilpasning af Vero-celler til suspensionsvækst til rabiesvirusproduktion i forskellige serumfrie medier. Vaccine 2019.