Eine hocheffiziente Methode des Gentransfers in Säugetierzellen ist die Infektion mit retroviralen Vektoren. Die Effizienz der retroviralen Infektion wird signifikant erhöht, 100 bis 1.000-fach in einigen Zellen, durch die Einbeziehung von Polybren während der Infektion. Polybren mit einem DMSO-Schock wird auch verwendet, um den DNA-Transfer in eine Vielzahl von Zelltypen wie CHO, Hühnerembryo-Fibroblasten, NINH-3T3 und myeloische Zellen zu vermitteln.
Protokoll: Retrovirale Infektion
Rekombinante retrovirale Bestände werden durch Zugabe von 5 ml Wachstumsmedium mit 5% Serum zu einer nahezu konfluenten Monoschicht transfizierter retroviraler Verpackungszellen in einer 100-mm-Platte hergestellt. Nach 24 Stunden wird das Medium entfernt und durch einen 0,45um Filter filtriert. Zellen, die mit diesem rekombinanten retroviralen Stamm infiziert werden sollen, werden mit 500.000 Zellen pro 100 mm Platte in 10 ml vollständigem Medium plattiert.
24 Stunden später das Wachstumsmedium aus den Zellen entfernen. Zellen mit 2 ml des Virusüberstandes (oder einer Verdünnung des Virusbestands in 2 ml) in Gegenwart von 5 bis 10 ug Polybren pro ml (Endkonzentration) infizieren. Zellen 3 bis 6 Stunden bei 37°C inkubieren.
8 ml vollständiges Medium zugeben. Drei Tage nach der Infektion die Zellen 1:5 in Selektionsmedium aufteilen.

Toyoshima, K. und Vogt, P.K., 1969. Virologie. 38: 414-426
Coelen, JR, Jose, DG und May, JT 1983. Bogen. Virol. 75:307-311
Protokoll: Transfektion
Plattenzellen bei etwa 50%iger Konfluenz in vollständigem Wachstumsmedium.
18 bis 24 Stunden nach der Beschichtung die DNA-Medium-Polybren-Lösung unmittelbar vor der Verwendung wie folgt vorbereiten:
Hinweis: Jede Komponente muss in der richtigen Reihenfolge zugegeben werden.
1.: Komplettes Wachstumsmedium (2 ml für eine 60-mm-Platte und 3 ml für eine 100-mm-Platte) auf 37 ° C erwärmt.
2.: Plasmid-DNA, 10ng bis 10ug. Vorsichtig mischen.
3.: Polybren auf eine Endkonzentration von 5ug bis 10ug pro ml. Vorsichtig mischen
Medium von der Platte entfernen und DNA-Medium-Polybrenlösung zu den Zellen geben. Inkubieren Sie die Zellen bei 37 ° C für 6 bis 20 Stunden mit gelegentlichem leichtem Schaukeln ungefähr alle 1.5 stunden für die ersten 6 Stunden.
DNA-Medium-Polybrenlösung entfernen und Zellen vorsichtig mit DMSO-Schocklösung (15% DMSO in 1X HBSS: Specialty Media Catalog # S-051-D) 3 ml pro 60-mm-Schale und 4 ml pro 100-mm-Platte überlagern. Schaukeln Sie die Schale manuell 10 Sekunden lang, um die Lösung gleichmäßig zu verteilen, und inkubieren Sie dann die Zellen genau 4 Minuten lang bei 37 ° C.
Entfernen Sie sofort die DMSO-Schocklösung und spülen Sie die Zellen zweimal vorsichtig mit vollständigem Wachstumsmedium aus, 5 ml pro Waschgang pro 60-mm-Schale, 10 ml pro Waschgang pro 100-mm-Schale
Fügen Sie den Zellen vollständiges Wachstumsmedium hinzu.
Für stabile Transformanten, entfernen Sie die Wachstumsmedien und teilen Sie die Zellen 1:5 in Auswahlmedium.
Für vorübergehende Expression das Wachstumsmedium entfernen und frisches Wachstumsmedium hinzufügen. Ernte Zellen und/ oder Medium nach 24 bis 72 Stunden.

W.G.Chaney et al., 1986. Somatische Zell- und Molekulargenetik. Vol. 12, Nr. 23,
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Aubin, R.J. et al. 1988. Somatische Zell- und Molekulargenetik. Vol. 14, Nr. 2, 155-167.
Schreiber, A. et al., 1998. Nukleinsäureforschung. Vol. 16, No. 5, 2352
Das Reagenz wird durch 0,2 um Membranen filtriert und mit sterilem H20 hydratisiert.