UHPLC y UPLC son técnicas de cromatografía líquida utilizadas para separar los diferentes componentes que se encuentran en las mezclas. Comentario: La premisa como se dijo, implica una diferencia entre UHPLC y UPLC cuando en realidad son las mismas técnicas. En 2004, Waters lanzó la técnica conocida como UltraPerformance LC (UPLC) basada en partículas porosas de menos de 2 micras y con el acrónimo UPLC. Cuando los vendedores ingresaron al mercado con instrumentos similares, UHPLC se acuñó como una forma de referirse a instrumentos similares a UPLC, ya que UPLC es una marca registrada de Waters. Se entiende que los dos términos son sinónimos. La tecnología habilitante aquí para los instrumentos UHPLC y UPLC es partículas de menos de 2 micras; la mayoría de los métodos de HPLC se desarrollan en partículas de entre 2,5 y 5 micras de tamaño. Las partículas menores de 2 micras requieren una presión más alta para trabajar con sistemas UHPLC o UPLC, por lo que deben ser capaces de operar por encima de 6,000 PSI, que es típicamente el límite superior de las HPLC convencionales.

Una mezcla es una sustancia compuesta por dos o más elementos y compuestos químicos que no se han unido durante una reacción química. Comentario: «Cromatografía líquida» es la separación de componentes solubilizados en un líquido. Mediante el uso de una columna, los componentes de la mezcla interactúan/se difunden a través de la columna y en sus poros o superficie en mayor o menor medida y se separan. Dado que las partículas de menos de 2 micras son tan pequeñas, la trayectoria de difusión entre los analitos de muestra y la fase estacionaria es más corta y la eficiencia es mayor. Las partículas de núcleo sólido, que ahora están en aumento, están encapsuladas por una superficie de partículas pequeñas, por lo que la difusión de la trayectoria es menor y la eficiencia es mayor, PERO aún depende del «grosor «de la capa de partículas alrededor del»núcleo» sólido. La CLAR, la UHPLC y la predecesora de la UPLC se basaban en bombas, que pasaban un líquido presurizado que contenía una mezcla de muestras a través de materiales absorbentes. Comentario: Se requieren bombas con UHPLC y UPLC. Cuando empuja un líquido a través de la columna empacada, se requiere una bomba que produzca contrapresión. En algunos casos, la fase móvil se presuriza antes de entrar en contacto con la columna analítica, pero la muestra se introduce más tarde.

Durante los últimos 6 años, UHPLC y UPLC han pasado a primer plano. Tanto UHPLC como UPLC permiten a los científicos lidiar con partículas más pequeñas más rápidamente de lo que antes era posible, sin embargo, existen diferencias clave entre los dos sistemas. Comentario: En lugar de tener que lidiar con partículas más pequeñas, UHPLC y UPLC permiten a los científicos lidiar con desafíos analíticos más rápidos de lo que era posible anteriormente.

¿Qué es UPLC?

Los sistemas UPLC (cromatografía líquida de ultra rendimiento) se introdujeron por primera vez en 2004. Al duplicar casi la presión de operación total (a 15,000 psi) para obtener caudales más rápidos, los desarrolladores de UPLC pudieron lograr separaciones LC de igual o mejor resolución en plazos mucho más cortos. Comentario: En lugar de» duplicar la presión de operación general para obtener caudales más rápidos», es mejor decir … » Para aprovechar las partículas de 2 micras, se requieren presiones más altas.»El ID típico de una columna UPLC es 2.1 mm y, en general, los caudales son inferiores a los de la CLAR, pero debido al aumento de la eficiencia, explicado anteriormente, se reduce el tiempo de separación total. En términos de eficiencia, precisión y productividad, esta fue una buena noticia para los laboratorios de todo el mundo. UPLC es una variante de HPLC, que también utiliza columnas y bombas. Comentario: Ya sea que estemos hablando de HPLC, UPLC o UHPLC, cada una de estas técnicas emplea columnas y bombas.

¿Qué es UHPLC?

Por el contrario, la cromatografía líquida de ultra alto rendimiento UHPLC (ultra high performance liquid chromatography) funciona en el rango de 20,000 psi. Comentario: Esto simplemente no es cierto. Algunos sistemas UHPLC pueden ir tan altos, pero no todos. En general, los instrumentos UPLC son sistemas de menor dispersión y volumen (columna adicional) que pueden operar a presiones más altas.? A diferencia de UPLC, el nombre no es una marca registrada, y puede referirse a varios sistemas de fabricantes. Los sistemas UHPLC se diseñaron con un bajo volumen de permanencia en mente. Comentario: Volumen de permanencia es un término que se refiere a las separaciones de gradientes; volumen de columna adicional y dispersión son mejores términos para usar. Los UPLC tienen volúmenes de permanencia más bajos, pero esto se debe a que el volumen de columna adicional se minimiza. Tener un volumen bajo no es el único atributo de rendimiento de un sistema UPLC. Ofrecen tasas de eficiencia más altas que los sistemas UPLC, aunque también son propensos al bloqueo. Comentario: No estoy seguro de dónde viene esto. Si una muestra no se prepara adecuadamente, es posible obstruir una columna UHPLC o UPLC de menos de 2 micrones. Es la columna la que puede obstruirse, no el sistema. El artículo UHPLC o Core-Shell, ¿Cuál es el Ganador? analiza las ventajas de los sistemas relativos con más detalle.

¿Para qué se utilizan los sistemas UPLC y UHPLC?

UPLC y UHPLC se han utilizado para muchos propósitos, incluidos legales, farmacéuticos y médicos. Los sistemas también son herramientas importantes en los campos de la investigación y la fabricación. Sin HPLC, UPLC y UHPLC, los científicos tendrían dificultades para detectar la presencia de medicamentos que mejoran el rendimiento en las muestras proporcionadas por los atletas, mientras que detectar los niveles de vitamina D en el suero sanguíneo llevaría mucho más tiempo de lo que lo hace hoy en día. Comentario: La velocidad, resolución y sensibilidad de los instrumentos UHPLC y UPLC los hacen ideales para su uso con MS. La asequibilidad y facilidad de uso de una nueva generación de instrumentos de MS está haciendo que LC-MS sea más práctico para más laboratorios.

Por lo tanto, estas tecnologías representan un importante paso adelante. Naturalmente, se están desarrollando tecnologías aún más rápidas y precisas a medida que lee este artículo. Sin embargo, por el momento, los sistemas UPLC y UHPLC permanecen a la vanguardia de gran parte del esfuerzo científico.

Últimamente, los avances en instrumentación analítica y química de fase estacionaria han llevado a los cromatógrafos a reevaluar los sistemas y métodos que utilizan a diario. El artículo Optimización de Columnas UHPLC de Núcleo para Mejorar las Separaciones de Proteínas y Péptidos trata esto con más detalle.

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