¿Qué son las Proteínas de Andamio?

Los andamios de proteínas son miembros de la cascada de señalización aguas abajo de los receptores de superficie celular. Las proteínas de andamio ayudan a transmitir el mensaje entre la membrana celular y el núcleo más rápido. Lo hacen al servir como un sitio de acoplamiento para múltiples socios de proteínas en la cascada para que puedan estar cerca el uno del otro. Esta proximidad reduce el tiempo necesario para que una proteína de la cascada encuentre a su pareja. Algunos andamios de proteínas permanecen descargados hasta que les llega un mensaje de un receptor de membrana activado, después de lo cual son acoplados por varias proteínas en la cascada. Otros andamios de proteínas están acoplados por proteínas en la cascada incluso antes de que un receptor de membrana activado les envíe un mensaje, aumentando la eficiencia en la que el mensaje se transmite del receptor al núcleo.

GPCR y Proteínas de Andamio

Los receptores Acoplados a proteínas G (GPCR) son una gran clase de proteínas de la superficie celular que transmiten señales extracelulares al núcleo. Un ejemplo de GPCR es el receptor β-adrenérgico que detecta la hormona adrenalina. Una vez activados por un ligando en la superficie celular externa, los GPCR activan sus proteínas G afines que residen en la membrana celular interna. Las proteínas G activadas se deslizan a lo largo del interior de la membrana celular para activar una cascada de proteínas y enzimas que a su vez amplifican el mensaje original recibido por la GRCP. Las proteínas de andamio son centros clave de información aguas abajo de los GPCR activados. Las proteínas de andamio reclutan miembros aguas abajo de una cascada de señalización a la membrana celular interna muy rápidamente, o antes de tiempo, lo que hace que sea eficiente que el mensaje se mueva de la GRCP al citosol.

Estados de activación de la Cascada de Señalización

La complejidad de la señalización intracelular es que las proteínas en una cascada de señalización tienen estados de actividad variables (es decir, apagado, parcialmente activo, completamente activo). Estos estados dependen de los cambios conformacionales que resultan de las interacciones con otras proteínas. También dependen de la presencia o ausencia de mitades, como grupos fosfato, grupos ubiquitina e iones de calcio. El estado de activación de una proteína de señalización se utiliza a menudo como un indicador de si se ha activado una determinada vía. Por ejemplo, el MEK fosforilado o ERK a menudo se interpreta como la activación de una vía de señalización intracelular aguas abajo de una GPCR. Además, estas proteínas de señalización pueden tener múltiples sitios de fosforilación, diferentes combinaciones de las cuales afectan el nivel de actividad o vida media de la proteína. Se sabe que proteínas como MEK y ERK se unen entre sí en proteínas de andamio. La capacidad de las proteínas del armazón para unirse a MEK y ERK también está regulada en términos del estado de activación del armazón, que cambia después de la modificación post-traslacional mediante la adición de fracciones químicas.

Elegir los Epítopos Correctos para Obtener Información Precisa

La complejidad antes mencionada de la señalización intracelular es precisamente la razón por la que elegir los anticuerpos correctos es crucial cuando los investigadores buscan determinar con precisión el estado de una célula en respuesta a estímulos extracelulares. Cada conformación activa de una proteína o sitio de fosforilación puede servir como un epítopo diferente que puede ser unido por un anticuerpo. Por lo tanto, los anticuerpos diseñados para detectar la presencia o ausencia de una fracción química en una proteína de señalización pueden dar a los investigadores una imagen clara de qué vía se ha activado y en qué medida. Los epítopos fosforilados son a menudo blancos de inmunoblotting e inmunolocalización in situ. Dado que una proteína puede tener múltiples sitios de fosforilación, cada uno de los cuales afecta a la proteína de manera diferente, además de múltiples sitios para mitades como la ubiquitinación, elegir los epítopos correctos para detectar es una tarea fructífera, pero no trivial.

Múltiples epítopos, ya sea en la misma proteína o en proteínas diferentes, pueden detectarse simultánea o secuencialmente en la misma mancha o en las mismas células. Por lo tanto, es importante que la especie huésped adecuada para los anticuerpos primarios y secundarios se considere con previsión. Los anticuerpos de dominio único también son útiles para estos experimentos, que se suman a la versatilidad de combinaciones de anticuerpos que se pueden usar en el mismo ensayo.

Los anticuerpos monoclonales y policlonales son útiles para detectar el estado de las cascadas de señalización intracelular. Nuestra guía de selección de anticuerpos facilita la selección de la combinación correcta de anticuerpos. Toma en consideración la especie del espécimen, la especie huésped, el nivel deseado de especificidad y las preocupaciones de reactividad cruzada, entre otros factores. La guía de selección de anticuerpos le llevará a las mejores opciones para anticuerpos de un solo propósito o aquellos que utilizará en múltiples aplicaciones. La combinación correcta de anticuerpos dirigidos a epítopos estratégicos aportará claridad al estado de cualquier cascada de señalización intracelular.