Auteur : AcceGen R &Équipe D

L’origine des cellules Vero dans la recherche de Vaccins Viraux Cellules Vero

Les cellules Vero sont reconnues par l’Organisation mondiale de la Santé (OMS) et la Pharmacopée chinoise pour la production de vaccins. Les cellules Vero, également connues sous le nom de cellules rénales de singe vert africain, ont été officiellement isolées des reins de singe vert africain par les chercheurs japonais Yasumura Y et Kawakita Y en 1962. C’était la première cellule dépendante de la fixation de l’aneuploïdie utilisée pour produire des produits biologiques humains et établir des lignées cellulaires et une banque de cellules de différentes générations en même temps.

La relation entre les cellules Vero et les vaccins viraux

Les vaccins viraux ont été largement utilisés pour prévenir de nombreuses maladies, notamment la rage, la grippe et la variole. Cependant, les vaccins ne sont toujours pas abordables pour les populations vulnérables dans les zones d’endémie, le coût du vaccin et les énormes besoins mondiaux sont les principaux obstacles à une utilisation équitable et mondiale des vaccins viraux humains.

Les cellules Vero peuvent être appliquées à des gammes de production de vaccins allant des vaccins vivants contre le rotavirus aux vaccins vivants atténués contre la grippe en passant par le développement de vaccins à virus entiers inactivés. Les cellules Vero ne peuvent pas exprimer l’interféron protéique antiviral en raison de leurs défauts génétiques inhérents. Par conséquent, la grande sensibilité des cellules Vero a favorisé le développement de la production de vaccins en utilisant les cellules Vero comme substrat.

Les cellules Vero présentent les avantages suivants par rapport aux lignées cellulaires primaires et diploïdes pour la production de produits biologiques. Premièrement, la banque de cellules est facile à établir et à conserver, tout en pouvant être traversée en continu avec un taux de croissance rapide. Deuxièmement, les cellules Vero ont des traits génétiques stables et une faible probabilité de malignité. Troisièmement, les cellules Vero sont sensibles à une variété de virus et ont des titres de virus élevés. Enfin, les cellules Vero pourraient être extrêmement résistantes à diverses conditions de culture, et les exigences ne sont pas élevées pour qu’elles puissent bien se développer à la surface du microcarrier, ce qui prouve que les cellules Vero ont une valeur significative dans le développement d’une série de vaccins viraux.

Comment cultiver des cellules Vero adhérentes

La croissance des cellules Vero dépend de l’ancrage et les cellules Vero ne peuvent proliférer que si elles sont dotées d’une surface appropriée. Les cellules Vero adhérentes ont été cultivées séparément dans des cultures MEM, Medium 199 et DMEM complétées par 10% de FBS sous 5% de CO2 et 37 ℃. Les chercheurs ont constaté que les cellules Vero, la concentration cellulaire la plus élevée atteignait 25,6 ± 1,1 × 104 cellules / cm2 dans le groupe DMEM + FBS, ce qui augmentait de 50,1% par rapport au groupe MEM + FBS et de 89,6% du groupe M199 + FBS (figure1).

Figure1. Comparaison de la croissance des cellules Vero dans différents milieux de culture (n = 5)

En outre, plus de cellules mortes sphéroïdales ont été trouvées dans le groupe de milieux M199+FBS. En conclusion, le groupe de milieu DMEM + FBS est plus approprié pour la croissance des cellules Vero et a finalement été sélectionné pour des recherches ultérieures (figuer2).

Figure2. Images de croissance des cellules Vero dans différents milieux au jour 4, (1) MEM + FBS, (2) M199 + FBS, (3) DMEM + FBS

Les FBS peuvent fournir aux cellules Vero les substances nécessaires à la culture d’attachement in vitro, telles que des facteurs d’attachement, des facteurs de croissance et des hormones, ce qui pourrait fournir un environnement stable in vitro et favoriser la croissance cellulaire à haute densité.

Cependant, le sérum est un mélange complexe d’éléments et ses composants ne sont pas complètement clairs. Par conséquent, l’utilisation du sérum dans la technologie de culture cellulaire présente de nombreux inconvénients, ce qui augmente l’instabilité du processus de production du vaccin et la difficulté du contrôle de la qualité du vaccin. Les chercheurs ont commencé à utiliser des milieux sans sérum de cellules animales pour remplacer les milieux sériques bovins traditionnels, qui sont devenus une tendance de développement essentielle pour la production de vaccins viraux.

Adaptation des cellules Vero adhérentes à la croissance en suspension dans l’application IPT-AFM

: L’utilisation d’une nouvelle lignée cellulaire Vero en suspension combinée à l’IPT-AFM, un milieu développé en interne sans composants animaux, contribuera grandement à réduire le coût du vaccin.

Les cellules Vero adhérentes ont été initialement cultivées soit en Milieu Essentiel Minimum (MEM) additionné de FBS à 10%, soit en IPT-AFM (un milieu animal développé en interne sans composants). La culture cellulaire a été utilisée comme ballon de secousse à déflecteur à une densité d’ensemencement de 7×104 cellules / cm2, puis les cellules ont été infectées à un MOI de 0,1, sans procéder à un échange de milieu.

Pour la culture en suspension, cinq milieux commerciaux sans sérum / définis chimiquement ont été testés à côté de l’IPT-AFM. Les cellules Vero utilisaient trois méthodes différentes (figure3), puis les cellules étaient surveillées quotidiennement parmi les paramètres cinétiques. Pour l’évaluation de la viabilité, les cellules ont été colorées avec du bleu de trypan (0,2% (p/v) dans une solution saline tamponnée au phosphate (PBS). Leurs résultats montrent que les cellules Vero en suspension se développaient mieux dans la troisième culture, comme le montre la figure4, et que les cellules Vero étaient capables de croître en suspension dans l’IPT-AFM.

Figure3. Adaptation des cellules Vero adhérentes à la culture en suspension selon les trois protocoles.

srcset= »//assets.accegen.com/wp-content/uploads/2020/04/图片4.png 414w, //assets.accegen.com/wp-content/uploads/2020/04/图片4-300×243.png 300w » sizes= »(max-width: 414px) 100vw, 414px » class= »alignnone »>Figure4. Croissance de cellules Vero adaptées à la culture en suspension dans des flacons agités selon 3 protocoles différents (données issues de 12 passages).

Conclusion

Le principal domaine d’application de la technologie du milieu de culture cellulaire Vero était le développement et la production de vaccins viraux. La fabrication de vaccins utilisant des cellules Vero comme matrice a amélioré la sécurité et la contrôlabilité de la qualité des produits.

À l’avenir, les cellules Vero pourraient être utilisées dans le développement et l’application des vaccins actuels contre le coronavirus (COVID-19). Le virus COVID-19 peut tirer des leçons de l’expérience du développement de vaccins contre le virus de la rage utilisant des cellules Vero, qui ont fait que les cellules Vero transforment l’état adhérent en culture en suspension (culture sans sérum). L’efficacité de l’infection et le titre de virus ont été détectés après une transfection avec des virus COVID-19.

Lignée cellulaire d’AcceGen Vero

AcceGen cultive et fournit la lignée cellulaire de rein de singe vert africain – Vero, Vero (sans AC), Vero 76. Pour des informations plus détaillées, veuillez visiter notre site Web ou contacter [email protected]

1. Yasumura Y KY: Études sur le SV40 en culture tissulaire – étape préliminaire pour la recherche sur le cancer in vitro. Nihon rinsho 1963, 21:1201-1215.

2. Barrett PN, Terpening SJ, Snow D, Cobb RR, Kistner O: Vero cell technology for rapid development of inactivated whole virus vaccines for emerging viral diseases. Revue d’experts des vaccins 2017, 16 (9): 883-894.

3. Khaled Trabelsi MBZ, Héla Kallel: Purification du virus de la rage produit dans des cellules Vero cultivées en milieu sans sérum. vaccin 2019.

4. Shen CF, Guilbault C, Li X, Elahi SM, Ansorge S, Kamen A, Gilbert R: Développement d’une technologie de processus de culture cellulaire Vero adaptée à la suspension pour la production de vaccins viraux. Vaccin 2019, 37 (47): 6996-7002.

5. Orr-Burks N, Murray J, Wu W, Kirkwood CD, Todd KV, Jones L, Bakre A, Wang H, Jiang B, Tripp RA: Les cellules vero modifiées par gène comme substrats du vaccin contre le rotavirus. Vaccin: X 2019, 3:100045.

6. Yang J, Guertin P, Jia G, Lv Z, Yang H, Ju D: Culture à grande échelle de microcarriers de cellules HEK293T et de cellules Vero dans des bioréacteurs à usage unique. AMB Express 2019, 9 (1):70.

7. Samia Rourou MBZ, Héla Kallel: Adaptation des cellules Véro à la croissance en suspension pour la production du virus de la rage dans différents milieux sans sérum. Vaccin 2019.