L’UHPLC et l’UPLC sont toutes deux des techniques de chromatographie en phase liquide utilisées pour séparer les différents composants présents dans les mélanges. Commentaire: La prémisse telle qu’énoncée implique une différence entre UHPLC et UPLC alors qu’il s’agit en fait des mêmes techniques. En 2004, Waters a lancé la technique connue sous le nom d’UltraPerformance LC (UPLC) basée sur des particules poreuses inférieures à 2 microns et a déposé l’acronyme UPLC. Lorsque les fournisseurs sont entrés sur le marché avec des instruments similaires, UHPLC a été inventé pour désigner des instruments similaires à UPLC, car UPLC est une marque déposée de Waters. Les deux termes sont considérés comme synonymes. La technologie habilitante ici pour les instruments UHPLC et UPLC est des particules inférieures à 2 microns; la plupart des méthodes HPLC sont développées sur des particules de taille comprise entre 2,5 et 5 microns. Les particules inférieures à 2 microns plus petites nécessitent une pression plus élevée pour fonctionner avec des systèmes UHPLC ou UPLC, de sorte que les systèmes doivent pouvoir fonctionner au-dessus de 6 000 PSI, ce qui est généralement la limite supérieure des HPLC classiques.

Un mélange est une substance comprenant deux éléments et composés chimiques ou plus, qui n’ont pas été liés ensemble au cours d’une réaction chimique. Commentaire: La « chromatographie liquide » est la séparation de composants solubilisés ensemble dans un liquide. En utilisant une colonne, les composants du mélange interagissent / diffusent à travers la colonne et dans ses pores ou sa surface dans une plus ou moins grande mesure et se séparent. Comme les particules inférieures à 2 microns sont si petites, le chemin de diffusion entre les analytes de l’échantillon et la phase stationnaire est plus court et l’efficacité est plus élevée. Les particules de noyau solide, qui sont maintenant à la hausse, sont encapsulées par une surface de petites particules, de sorte que la diffusion du trajet est encore moindre et que l’efficacité est plus élevée, MAIS dépend toujours de « l’épaisseur » de la couche de particules autour du « noyau » solide.
La CLHP, l’UHPLC et le prédécesseur de l’UPLC, reposaient sur des pompes, qui faisaient passer un liquide sous pression contenant un mélange d’échantillons à travers des matériaux absorbants. Commentaire: Des pompes sont nécessaires avec UHPLC et UPLC. Lorsque vous poussez un liquide à travers la colonne emballée, une pompe est nécessaire pour produire une contre-pression. Dans certains cas, la phase mobile est pressurisée avant d’entrer en contact avec la colonne d’analyse, mais l’échantillon est introduit plus tard.

Au cours des 6 dernières années, l’UHPLC et l’UPLC sont apparues au premier plan. L’UHPLC et l’UPLC permettent aux scientifiques de s’attaquer à des particules plus petites plus rapidement que ce qui était possible auparavant, cependant, des différences clés existent entre les deux systèmes. Commentaire: Plutôt que d’avoir à s’attaquer à des particules plus petites, l’UHPLC et l’UPLC permettent aux scientifiques de relever plus rapidement des défis analytiques que ce qui était possible auparavant.

Qu’est-ce que l’UPLC ?

Les systèmes UPLC (chromatographie liquide ultra performante) ont été introduits pour la première fois en 2004. En doublant presque la pression de fonctionnement globale (à 15 000 psi) afin d’obtenir des débits plus rapides, les développeurs UPLC ont pu obtenir des séparations LC de résolution égale ou meilleure dans des délais beaucoup plus courts. Commentaire: Plutôt que de « doubler la pression de fonctionnement globale afin d’obtenir des débits plus rapides », il vaut mieux dire … « Pour tirer parti des particules de 2 microns, des pressions plus élevées sont nécessaires. »L’ID typique d’une colonne UPLC est 2.1 mm et en général les débits sont inférieurs à la CLHP, mais en raison de l’augmentation du rendement, expliquée ci-dessus, le temps de séparation global est réduit. En termes d’efficacité, de précision et de productivité, c’était une bonne nouvelle pour les laboratoires du monde entier. UPLC est une variante de la CLHP, utilisant également des colonnes et des pompes. Commentaire: Qu’il s’agisse de CLHP, d’UPLC ou d’UHPLC, chacune de ces techniques utilise des colonnes et des pompes.

Qu’est-ce que l’UHPLC ?

En revanche, l’UHPLC (chromatographie liquide ultra haute performance) fonctionne dans la plage de 20 000 psi. Commentaire: Ce n’est tout simplement pas vrai. Certains systèmes UHPLC peuvent aller aussi haut, mais pas tous. En général, les instruments UPLC sont des systèmes à faible dispersion et à volume inférieur (colonne supplémentaire) qui peuvent fonctionner à des pressions plus élevées.? Contrairement à UPLC, le nom n’est pas une marque déposée et peut faire référence à un certain nombre de systèmes de fabricants. Les systèmes UHPLC ont été conçus avec un faible volume de séjour à l’esprit. Commentaire: Le volume d’arrêt est un terme qui fait référence aux séparations de gradients; le volume de colonne supplémentaire et la dispersion sont de meilleurs termes à utiliser. Les UPLC ont des volumes d’arrêt plus faibles, mais cela est dû au fait que le volume extra-colonne est minimisé. Avoir un faible volume n’est pas le seul attribut de performance d’un système UPLC. Ils offrent des taux d’efficacité plus élevés que les systèmes UPLC, mais sont également sujets au blocage. Commentaire: Je ne sais pas d’où cela vient. Si un échantillon n’est pas préparé correctement, il est possible d’obstruer une colonne UHPLC ou UPLC inférieure à 2 microns. C’est la colonne qui peut se boucher, pas le système. L’article UHPLC ou Core-Shell, Qui est le gagnant? discute plus en détail des avantages des systèmes relatifs.

À quoi servent les systèmes UPLC et UHPLC ?

UPLC et UHPLC ont été utilisés à de nombreuses fins, notamment juridiques, pharmaceutiques et médicales. Les systèmes sont également des outils importants dans les domaines de la recherche et de la fabrication. Sans HPLC, UPLC et UHPLC, les scientifiques auraient du mal à détecter la présence de médicaments améliorant les performances dans les échantillons fournis par les athlètes, tandis que la détection des niveaux de vitamine D dans le sérum sanguin prendrait beaucoup plus de temps qu’aujourd’hui. Commentaire: La vitesse, la résolution et la sensibilité des instruments UHPLC et UPLC les rendent parfaitement adaptés à une utilisation avec la SEP. L’abordabilité et la facilité d’utilisation d’une nouvelle génération d’instruments MS rendent le LC-MS plus pratique pour un plus grand nombre de laboratoires.

Ces technologies représentent donc un pas en avant important. Naturellement, des technologies encore plus rapides et plus précises sont développées à mesure que vous lisez cet article. Cependant, pour le moment, les systèmes UPLC et UHPLC restent à la pointe de nombreuses activités scientifiques.

Récemment, les progrès de l’instrumentation analytique et de la chimie des phases stationnaires ont conduit les chromatographes à réévaluer les systèmes et les méthodes qu’ils utilisent au quotidien. L’article Optimisation des colonnes UHPLC Cœur-Coque pour améliorer la Séparation des Protéines et des Peptides traite de cela plus en détail.

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