Description

La solution de stabilisation de l’ARN RNAlater stabilise et protège l’ARN cellulaire dans des échantillons de tissus intacts et non congelés, éliminant ainsi la nécessité de traiter immédiatement des échantillons de tissus ou de congeler des échantillons dans de l’azote liquide pour un traitement ultérieur. Les morceaux de tissu peuvent être récoltés et immergés dans une solution de stabilisation de l’ARN RNAlater pour le stockage sans compromettre la qualité ou la quantité d’ARN obtenue après l’isolement ultérieur de l’ARN. Avantages de l’utilisation d’une solution de stabilisation de l’ARN RNAlater:
• Efficacité — stabiliser l’ARN pendant 1 jour à 37 ° C, 1 semaine à 25 ° C, 1 mois à 4 ° C ou indéfiniment à -20 ° C
• Simplicité — un seul réactif qui inactive immédiatement les RNases et stabilise l’ARN dans les tissus ou les cellules
• Commodité — pas besoin de congeler des échantillons dans de l’azote liquide ou de renvoyer les échantillons au congélateur du laboratoire
• Mobilité — parfait pour la collecte de tissus « sur le terrain »
• Polyvalence — compatible avec de nombreuses procédures d’isolement de l’ARN, y compris la plupart des kits d’isolement de l’ARN
Applications
La solution de stabilisation d’ARN de RNAlater a été testée sur une variété de tissus de mammifères, plantes, E. coli, xénope, poissons et Drosophiles. Il est idéal pour:
• Protéger l’intégrité de l’ARN dans les tissus riches en RNases
* Collecter des échantillons à différents moments sans avoir à traiter immédiatement les échantillons de chaque point temporel
* Archiver les tissus pour une future microdissection
* Submerger les cavités ou organes d’animaux pour stabiliser l’ARN lors de longues procédures de dissection
• Collecter des échantillons à des endroits (par ex. de la navette spatiale) où l’isolement immédiat de l’ARN n’est pas possible
• Expédition des échantillons sur glace humide ou même à température ambiante si expédiés pendant la nuit
Procédure de solution de stabilisation de l’ARN RNAlater
Le tissu disséqué (moins de 0,5 cm dans une dimension donnée) est simplement immergé dans environ 5 volumes de solution de RNAlater à température ambiante. La solution pénètre dans les cellules, stabilisant l’ARN. L’échantillon peut ensuite être conservé indéfiniment à -20 °C (le tissu ne gèle pas), à 4 °C pendant un mois maximum ou à 25°C pendant une semaine maximum. Pour l’isolement de l’ARN, le tissu est simplement retiré de la solution de RNAlater et traité comme s’il venait d’être récolté. La plupart des tissus peuvent être transférés directement dans un tampon de lyse et homogénéisés. Les échantillons traités avec une solution de RNAlater puis congelés peuvent être broyés avec du mortier et un pilon ou décongelés et traités comme des tissus frais sans se soucier de la rupture des cellules et de la libération de RNases puisque les RNases ont déjà été inactivées. Les cellules peuvent être filées et ensuite ajoutées au tampon de lyse, ou dans certains cas, une solution de RNAlater peut être ajoutée avec les cellules directement au tampon de lyse.
Compatible avec une variété de procédures
La solution de stabilisation de l’ARN RNAlater est compatible avec des méthodes d’isolement de l’ARN en une étape, telles que le réactif TRIzol; avec des méthodes de liaison au verre telles que le RNeasy de Qiagen ou le kit Ambion RNAqueous; avec des méthodes d’extraction de phénols acides telles que le kit Ambion ToTALLY RNA; et avec des méthodes utilisant la sélection oligo (dT) de l’ARNm, telles que le kit Ambion Poly (A) Purist ™. Des recherches internes, ainsi que des recherches indépendantes récemment publiées, indiquent que l’utilisation d’une solution de stabilisation de l’ARN RNAlater pour le stockage tissulaire n’affecte pas les résultats des expériences d’analyse d’expression d’ARN ultérieures par rapport à d’autres méthodes de traitement.