szerző: AcceGen r&D csapat

A vírus vakcinák eredete vero sejtek

A Vero sejteket az Egészségügyi Világszervezet (WHO) és a kínai gyógyszerkönyv elismeri vakcinák előállításában. A Vero sejteket, más néven afrikai zöld majom vesesejteket 1962-ben yasumura Y és Kawakita Y japán tudósok hivatalosan izolálták az afrikai zöld majom veséiből. Ez volt az első aneuploidia kötődésfüggő sejt, amelyet emberi biológiai termékek előállítására, valamint különböző generációk sejtvonalainak és sejtbankjának létrehozására használtak egyszerre.

A Vero sejtek és a vírusos vakcinák közötti kapcsolat

a vírusos vakcinákat széles körben használják számos betegség, köztük a veszettség, az influenza és a himlő megelőzésében. A vakcinák azonban még mindig nem megfizethetőek a veszélyeztetett népesség számára az endémiás területeken, a vakcina költsége és az óriási szükség világszerte a fő akadályok az emberi vírusos vakcinák méltányos és globális használatához.

A Vero sejtek alkalmazhatók a vakcina előállítására az élő rotavírus vakcináktól az élő attenuált influenza vakcinákon át az inaktivált teljes vírus vakcinák kifejlesztéséig. A Vero sejtek veleszületett genetikai hibáik miatt nem képesek expresszálni az antivirális fehérje interferont. Ezért a Vero sejtek széles érzékenysége elősegítette a vakcinák előállításának fejlődését, szubsztrátként Vero sejteket használva.

A Vero sejtek a következő előnyökkel rendelkeznek az elsődleges és diploid sejtvonalakhoz képest a biológiai termékek előállításához. Először is, a sejtbank könnyen létrehozható és megőrzhető, ugyanakkor folyamatosan áthaladható gyors növekedési ütemgel. Másodszor, a Vero sejtek stabil genetikai tulajdonságokkal rendelkeznek, és alacsony a malignitás valószínűsége. Harmadszor, a Vero sejtek érzékenyek a különböző vírusokra, és magas vírustiterrel rendelkeznek. Végül a Vero sejtek rendkívül ellenállóak lehetnek a különböző kulturális körülményekkel szemben, és a követelmények nem magasak ahhoz, hogy jól növekedjenek a mikrokocsik felületén, ami azt bizonyítja, hogy a Vero sejtek jelentős értéket képviselnek egy sor vírusos vakcina kifejlesztésében.

hogyan tenyésztjük a tapadó Vero sejteket

A Vero sejtek növekedése rögzítéstől függ, és a Vero sejtek csak megfelelő felülettel rendelkeznek. Az adherens Vero sejteket külön tenyésztettük MEM-ben, Medium 199-ben, és DMEM-et 10% – os FBS-sel egészítettünk ki 5% CO2 és 37 6c (6c) tenyészetek alatt. A kutatók azt találták, hogy a Vero sejtek, a legmagasabb sejtkoncentráció elérte a 25,6 (1,1) (104) sejt/cm2-t a DMEM + FBS csoportban, ami 50,1% – kal nőtt a MEM+FBS csoporthoz képest, és 89,6% – kal az M199+FBS csoporthoz képest (1 .ábra).

1.ábra. Vero sejtek növekedésének összehasonlítása különböző táptalajokban (n=5)

emellett több gömb alakú halott sejtet találtak az M199 + FBS táptalajcsoportban. Összefoglalva, a DMEM + FBS közepes csoport alkalmasabb a Vero sejtek növekedésére, és végül kiválasztották a későbbi kutatásokhoz (figuer2).

ábra 2. Vero sejtnövekedési képek különböző médiumokban a 4. napon, (1) MEM+FBS, (2) M199+FBS, (3) DMEM+FBS

az FBS biztosítja a Vero sejteket az in vitro kötődési kultúrához szükséges anyagokkal, például kötődési faktorokkal, növekedési faktorokkal és hormonokkal, amelyek In vitro stabil környezetet biztosíthatnak és elősegíthetik a nagy sűrűségű sejtnövekedést.

a szérum azonban elemek összetett keveréke, összetevői nem teljesen tiszták. Ezért a szérum sejttenyésztési technológiában történő alkalmazásának számos hátránya van, ami növelte a vakcina gyártási folyamatának instabilitását és a vakcina minőségellenőrzésének nehézségét. A kutatók állati sejtes szérummentes táptalajt kezdtek használni a hagyományos szarvasmarha-szérum táptalaj helyettesítésére, amely a vírusoltás előállításának alapvető fejlődési trendjévé vált.

A tapadó Vero sejtek adaptációja a szuszpenziós növekedéshez IPT-AFM-ben

alkalmazás: Egy új szuszpenziós Vero sejtvonal használata ipt-AFM-mel kombinálva, egy házon belül kifejlesztett állatkomponens-mentes táptalaj nagymértékben hozzájárul a vakcina költségének csökkentéséhez.

az adherens Vero sejteket kezdetben vagy minimális esszenciális táptalajban (mem) termesztették, kiegészítve 10% FBS-sel vagy IPT-AFM-mel (házon belül kifejlesztett állati komponensmentes táptalaj). A sejttenyészetet terelőlemez-rázólombikként használtuk a vetési sűrűség 7 604 sejt / cm2, majd a sejteket 0,1-es MOI-val fertőztük meg, anélkül, hogy közepes cserét folytatnánk.

szuszpenziós tenyészet esetében öt kereskedelmi szérummentes / kémiailag meghatározott táptalajt teszteltünk az IPT-AFM mellett. A Vero sejtek három különböző módszert alkalmaztak (3.ábra), majd a sejteket naponta monitoroztuk a kinetikai paraméterek között. Az életképesség értékeléséhez a sejteket trippankékkel festettük (0,2% (m/v) foszfátpufferelt sóoldatban (PBS) . Eredményeik azt mutatják, hogy a szuszpendált Vero sejtek a harmadik tenyészetben növekedtek a legjobban, amint az a 4.ábrán látható, és a Vero sejtek képesek voltak szuszpenzióban növekedni az IPT-AFM-ben.

3.ábra. A tapadó Vero sejtek adaptálása a szuszpenziós tenyészethez a három protokoll szerint.

4.ábra. A szuszpenziós tenyészethez adaptált Vero sejtek növekedése rázólombikokban 3 különböző protokoll szerint (12 szakasz adatai).

következtetés

A Vero sejttenyésztő táptalaj technológia fő alkalmazási területe a vírusvakcinák kifejlesztése és gyártása volt. A vakcinák vero sejtek mátrixként történő felhasználásával történő előállítása javította a termékminőség biztonságát és ellenőrizhetőségét.

a jövőben a Vero sejtek felhasználhatók a jelenlegi koronavírus vakcinák (COVID-19) kifejlesztésében és alkalmazásában. A COVID-19 vírus tanulhat a veszettség vírus elleni vakcinák vero sejtek felhasználásával történő kifejlesztésének tapasztalataiból, amelyek a Vero sejteket a tapadó állapotot szuszpenziós kultúrává (szérummentes tenyészetté) alakították át. A fertőzés hatékonyságát és a vírus titerét a COVID-19 vírusokkal történő transzfektálás után detektálták.

AcceGen Vero sejtvonal

AcceGen tenyészetek és biztosítja az afrikai zöld majom vese sejtvonal — Vero, Vero (AC-mentes), Vero 76. További részletes információkért kérjük, látogasson el weboldalunkra vagy vegye fel a kapcsolatot [email protected]

1. Yasumura Y KY: tanulmányok az SV40-ről a szövettenyészetben-előzetes lépés a rákkutatáshoz in vitro. Nihon rinsho 1963, 21: 1201-1215.

2. Barrett PN, Terpening SJ, Snow D, Cobb RR, Kistner O: Vero cell technológia az inaktivált teljes vírus vakcinák gyors kifejlesztéséhez a feltörekvő vírusos betegségek számára. A vakcinák szakértői áttekintése 2017, 16(9):883-894.

3. Khaled Trabelsi MBZ, H Kb Kallel: a veszettség vírusának tisztítása szérummentes táptalajban termesztett Vero sejtekben. vakcina 2019.

4. Shen CF, Guilbault C, Li X, Elahi SM, Ansorge S, Kamen A, Gilbert R: szuszpenzióhoz igazított Vero sejtkultúra-technológiai technológia fejlesztése vírusos vakcinák előállításához. Vakcina 2019, 37(47): 6996-7002.

5. Orr-Burks N, Murray J, Wu W, Kirkwood CD, Todd KV, Jones L, Bakre A, Wang H, Jiang B, Tripp RA: Génszerkesztett vero sejtek, mint rotavírus vakcina szubsztrátok. Vakcina: X 2019, 3: 100045.

6. Yang J, Guertin P, Jia G, Lv Z, Yang H, Ju D: Hek293t sejtek és Vero sejtek nagyméretű mikrokontroller tenyészete egyszer használatos bioreaktorokban. AMB Express 2019, 9(1): 70.

7. Samia Rourou MBZ, H ons Kallel: a Vero sejtek adaptációja a szuszpenziós növekedéshez a veszettség vírus termeléséhez különböző szérummentes táptalajokban. Vakcina 2019.