足場タンパク質
足場タンパク質とは何ですか？
タンパク質足場は、細胞表面受容体の下流のシグナリングカスケードのメンバーです。 足場蛋白質は細胞膜と核間のメッセージをより速く中継するのを助けます。 それらはカスケードの多数蛋白質パートナーのためのドッキングの場所として役立つことによってこれをします従って互いの近くにある場合もあります。 この近接性は、カスケード内の1つのタンパク質がそのパートナーを見つけるのに必要な時間を短縮します。 いくつかのタンパク質足場は、活性化された膜受容体からのメッセージがそれらに到達するまでアンロードされたままであり、その後、それらはカスケード内のいくつかのタンパク質によってドッキングされる。 他のタンパク質足場は、活性化された膜受容体がメッセージを受容体から核に中継される効率を高め、それらにメッセージを送信する前であっても、カ
GPCRsおよび足場タンパク質
Gタンパク質共役受容体（Gpcr）は、細胞外シグナルを核に中継する細胞表面 GPCRの例はホルモンのアドレナリンを感じるβ adrenergic受容器です。 外の細胞の表面の配位子によって活動化させて、Gpcrは内部の細胞膜に存在する同族のG蛋白質を活動化させます。 活性化されたGタンパク質は、細胞膜の内側に沿ってスライドして、タンパク質と酵素のカスケードを活性化し、GPCRによって受信された元のメッセージを増幅します。 足場タンパク質は、活性化されたGpcrの下流の情報の重要なハブである。 足場タンパク質は、メッセージがGPCRからサイトゾルに移動するために、それが効率的になり、非常に迅速に、または事前に内細胞膜にシグナリングカスケードの下流のメンバーを募集します。
シグナリングカスケードの活性化状態
細胞内シグナル伝達の複雑さは、シグナリングカスケード内のタンパク質が活性の様々な状態（すなわち、オフ、部分的に活性、完全に活性）を有することである。 これらの状態は、他のタンパク質との相互作用に起因する立体配座の変化に依存する。 それらはまた、リン酸基、ユビキチン基、およびカルシウムイオンのような部分の存在または非存在に依存する。 シグナル伝達タンパク質の活性化状態は、特定の経路が活性化されたかどうかの指標としてしばしば使用される。 例えば、リン酸化されたＭＥＫまたはＥＲＫは、ＧＰＣＲの下流の細胞内シグナル伝達経路の活性化を表すものとして解釈されることが多い。 さらに、これらのシグナル伝達タンパク質は、タンパク質の活性または半減期のレベルに影響を与える異なる組み合わせのリン酸化の複数のサイト ＭＥＫおよびＥＲＫのようなタンパク質は、足場タンパク質上で互いに近接して結合することが知られている。 足場タンパク質がＭＥＫおよびＥＲＫに結合する能力は、足場の活性化状態の観点からも調節され、足場の活性化状態は、化学部分の添加によって翻訳後修飾
正確な情報のための右のエピトープを選ぶ
細胞内シグナル伝達の前述の複雑さは、研究者が細胞外刺激に応答して細胞の状態を正確に決定しようとするときに右の抗体を選ぶことが重要である理由を正確に示している。 タンパク質またはリン酸化部位のそれぞれの活性立体配座は、抗体によって結合され得る異なるエピトープとして働くことができる。 したがって、シグナル伝達タンパク質上の化学部分の存在または非存在を検出するように設計された抗体は、研究者にどの経路が活性化されたか、 リン酸化されたエピトープは、多くの場合、免疫ブロッティングおよびin situ免疫局在アッセイの標的である。 タンパク質は複数のリン酸化部位を持つことができ、それぞれがタンパク質に異なる影響を与えるため、ユビキチン化などの部分の複数の部位に加えて、検出するための適切なエピトープを選ぶことは有益であるが、重要ではない作業である。
複数のエピトープは、同じタンパク質または異なるタンパク質上にあるかどうかにかかわらず、同じブロットまたは同じ細胞上で同時にまた したがって、一次抗体および二次抗体のための適切な宿主種を考慮して考慮することが重要である。 単一ドメイン抗体は、これらの実験にも有用であり、同じアッセイで使用することができる抗体の組み合わせの多様性を追加する。
モノクローナル抗体とポリクローナル抗体の両方が、細胞内シグナル伝達カスケードの状態を検出するのに有用である。 私達の抗体の選択ガイドは抗体の右の組合せを容易に選ぶことを作る。 これは、他の要因の中でも、標本種、宿主種、所望の特異性レベル、および交差反応性の懸念を考慮に入れる。 抗体選択ガイドは、単一目的の抗体または複数のアプリケーションで使用する抗体のための最良の選択肢にあなたを導くでしょう。 戦略的エピトープを標的とした抗体の適切な組み合わせは、任意の細胞内シグナリングカスケードの状態に明快さをもたらすでしょう。