czym są białka rusztowania ?

białka rusztowania są członkami kaskady sygnałowej poniżej receptorów powierzchniowych komórek. Białka rusztowania pomagają szybciej przekazywać wiadomość między błoną komórkową a jądrem. Robią to, służąc jako miejsce dokowania dla wielu partnerów białkowych w kaskadzie, aby mogli być blisko siebie. Ta bliskość skraca czas potrzebny na jedno białko w kaskadzie, aby znaleźć swojego partnera. Niektóre rusztowania białkowe pozostają rozładowane, dopóki nie dotrze do nich wiadomość od aktywowanego receptora membranowego, po czym są zadokowane przez kilka białek w kaskadzie. Inne rusztowania białkowe są zadokowane przez białka w kaskadzie, zanim aktywowany receptor błonowy wyśle do nich wiadomość, zwiększając wydajność, w której wiadomość jest przekazywana z receptora do jądra.

GPCRs i białka rusztowania

receptory sprzężone z białkiem G (GPCRs) są dużą klasą białek powierzchniowych komórek, które przekazują sygnały zewnątrzkomórkowe do jądra. Przykładem GPCR jest receptor β-adrenergiczny, który wyczuwa hormon adrenaliny. Po aktywacji przez ligand na zewnętrznej powierzchni komórki, GPCRs aktywują swoje poznane białka G, które znajdują się na wewnętrznej błonie komórkowej. Aktywowane białka G następnie przesuwają się wzdłuż wnętrza błony komórkowej, aby aktywować kaskadę białek i enzymów, które z kolei wzmacniają oryginalną wiadomość otrzymaną przez GPCR. Białka rusztowania są kluczowymi węzłami informacji za aktywowanymi GPCRs. Białka rusztowania bardzo szybko lub z wyprzedzeniem rekrutują dalszych członków kaskady sygnałowej do wewnętrznej błony komórkowej, co sprawia, że wiadomość jest skuteczna w przenoszeniu się z GPCR do cytozolu.

Stany aktywacji kaskady sygnałowej

złożoność sygnalizacji wewnątrzkomórkowej polega na tym, że białka w kaskadzie sygnałowej mają różne stany aktywności (tj. wyłączone, częściowo aktywne, w pełni aktywne). Stany te zależą od zmian konformacyjnych, które wynikają z interakcji z innymi białkami. Zależą one również od obecności lub braku grup, takich jak grupy fosforanowe, grupy ubikwityny i jony wapnia. Stan aktywacji białka sygnałowego jest często używany jako wskaźnik, czy pewna ścieżka została aktywowana. Na przykład fosforylowany MEK lub ERK jest często interpretowany jako reprezentujący aktywację wewnątrzkomórkowego szlaku sygnałowego poniżej GPCR. Ponadto te białka sygnalizacyjne mogą mieć wiele miejsc fosforylacji, różne kombinacje, które wpływają na poziom aktywności białka lub okres półtrwania. Wiadomo, że białka takie jak MEK i ERK wiążą się blisko siebie na białkach rusztowania. Zdolność białek rusztowania do wiązania MEK i ERK jest również regulowana pod względem stanu aktywacji rusztowania, który zmienia się po modyfikacji potranslacyjnej przez dodanie ugrupowań chemicznych.

Wybieranie właściwych epitopów w celu uzyskania dokładnych informacji

wspomniana złożoność sygnalizacji wewnątrzkomórkowej jest właśnie powodem, dla którego wybieranie właściwych przeciwciał jest kluczowe, gdy naukowcy starają się dokładnie określić stan komórki w odpowiedzi na bodźce zewnątrzkomórkowe. Każda aktywna konformacja białka lub miejsca fosforylacji może służyć jako inny epitop, który może być związany przez przeciwciało. Tak więc, przeciwciała, które są zaprojektowane do wykrywania obecności lub braku chemicznego ugrupowania na białku sygnalizacyjnym, mogą dać badaczom jasny obraz tego, jaki szlak został aktywowany i w jakim stopniu. Fosforylowane epitopy są często celem immunoblottingu i testów immunolokalizacji in situ. Ponieważ białko może mieć wiele miejsc fosforylacji, z których każde inaczej wpływa na białko, oprócz wielu miejsc dla ugrupowań, takich jak ubikwitynacja, wybranie właściwych epitopów do wykrycia jest owocnym – ale nietrywialnym – zadaniem.

wiele epitopów, czy to na tym samym lub różnych białkach, może być jednocześnie lub sekwencyjnie wykryte na tej samej plamce lub tych samych komórkach. Ważne jest zatem, aby z ostrożnością rozważać właściwe gatunki żywicieli przeciwciał pierwotnych i wtórnych. Przeciwciała pojedynczej domeny są również użyteczne w tych eksperymentach, które zwiększają wszechstronność kombinacji przeciwciał, które mogą być stosowane w tym samym teście.

zarówno przeciwciała monoklonalne, jak i poliklonalne są przydatne w wykrywaniu stanu wewnątrzkomórkowych kaskad sygnałowych. Nasz przewodnik doboru przeciwciał sprawia, że wybieranie odpowiedniej kombinacji przeciwciał jest łatwe. Bierze pod uwagę gatunki okazów, gatunki żywicieli, pożądany poziom swoistości i reaktywność krzyżową, między innymi. Przewodnik doboru przeciwciał doprowadzi Cię do najlepszych opcji dla przeciwciał jednofunkcyjnych lub tych, które będą używane w wielu aplikacjach. Odpowiednia kombinacja przeciwciał ukierunkowanych na epitopy strategiczne przyniesie klarowność w stanie dowolnej wewnątrzkomórkowej kaskady sygnałowej.