UHPLC i UPLC to techniki chromatografii cieczowej stosowane do oddzielania różnych składników występujących w mieszaninach. Komentarz: założenie, jak stwierdzono, implikuje różnicę między UHPLC i UPLC, gdy w rzeczywistości są to te same techniki. W 2004 roku Waters wprowadził technikę znaną jako UltraPerformance LC (UPLC) opartą na cząsteczkach porowatych o wielkości poniżej 2 mikronów i opatrzył akronimem UPLC. Gdy dostawcy weszli na rynek z podobnymi instrumentami UHPLC został ukuty jako sposób na odniesienie się do instrumentów podobnych do UPLC, ponieważ UPLC jest znakiem towarowym Waters. Te dwa terminy są rozumiane jako synonimy. Technologia umożliwiająca zarówno uhplc, jak i UPLC to cząstki poniżej 2 mikronów; większość metod HPLC jest opracowywana na cząsteczkach o wielkości od 2,5 do 5 mikronów. Mniejsze cząstki poniżej 2 mikronów wymagają wyższego ciśnienia do pracy z systemami UHPLC lub UPLC muszą być zdolne do pracy powyżej 6000 PSI, co jest zazwyczaj górną granicą konwencjonalnych HPLC.

mieszanina jest substancją zawierającą dwa lub więcej pierwiastków i związków chemicznych, które nie zostały połączone ze sobą podczas reakcji chemicznej. Komentarz: „chromatografia cieczowa” to oddzielenie składników rozpuszczonych razem w cieczy. Dzięki zastosowaniu kolumny składniki w mieszaninie oddziałują / dyfundują w poprzek kolumny i w jej porach lub powierzchni w mniejszym lub większym stopniu i zostają oddzielone. Ponieważ cząstki poniżej 2 mikronów są tak małe, ścieżka dyfuzji między analizowanymi próbkami a fazą stacjonarną jest krótsza, a wydajność jest wyższa. Stałe cząstki rdzenia, które obecnie rosną, są zamknięte przez powierzchnię małych cząstek, więc dyfuzja ścieżka jest jeszcze mniejsza, a wydajność jest wyższa, ale nadal zależy od „grubości) warstwy cząstek wokół stałego „rdzenia”.
HPLC, uhplc i poprzednik UPLC, opierały się na pompach, które przepuszczały ciecz pod ciśnieniem zawierającą mieszaninę próbki przez materiały chłonne. Komentarz: pompy są wymagane z UHPLC i UPLC. Podczas przepychania cieczy przez zapakowaną kolumnę wymagana jest pompa, która wytwarza ciśnienie wsteczne. W niektórych przypadkach Faza ruchoma jest pod ciśnieniem przed wejściem w kontakt z kolumną analityczną, ale próbka jest wprowadzana później.

w ciągu ostatnich 6 lat UHPLC i UPLC doszły do głosu. Zarówno UHPLC, jak i UPLC umożliwiają naukowcom zmaganie się z mniejszymi cząstkami szybciej niż było to wcześniej możliwe, jednak istnieją kluczowe różnice między tymi dwoma systemami. Komentarz: zamiast zmagać się z mniejszymi cząstkami, UHPLC i UPLC umożliwiają naukowcom radzenie sobie z bardziej analitycznymi wyzwaniami szybciej niż wcześniej było to możliwe.

co to jest UPLC?

systemy UPLC (Ultra performance liquid chromatography) zostały po raz pierwszy wprowadzone w 2004 roku. Przez prawie podwojenie ogólnego ciśnienia roboczego (do 15,000 psi) w celu uzyskania szybszych natężeń przepływu, deweloperzy UPLC byli w stanie osiągnąć równe lub lepsze rozdzielności LC w znacznie krótszych ramach czasowych. Komentarz: zamiast „podwojenia ogólnego ciśnienia roboczego w celu uzyskania szybszego przepływu” lepiej powiedzieć … ” aby wykorzystać 2 mikrony cząstek, wymagane są wyższe ciśnienia.”Typowy identyfikator kolumny UPLC to 2.1 mm i ogólnie natężenia przepływu są niższe niż HPLC, ale ze względu na wzrost wydajności, opisany powyżej, ogólny czas separacji jest skrócony. Pod względem wydajności, dokładności i produktywności była to dobra wiadomość dla laboratoriów na całym świecie. UPLC jest odmianą HPLC, również wykorzystującą kolumny i pompy. Komentarz: niezależnie od tego, czy mówimy o HPLC, UPLC czy UHPLC, każda z tych technik wykorzystuje kolumny i pompy.

co to jest UHPLC?

natomiast UHPLC (ultra high performance liquid chromatography) działa w zakresie 20 000 psi. Komentarz: to po prostu nieprawda. Niektóre systemy UHPLC mogą pójść tak wysoko, ale nie wszystkie. Ogólnie rzecz biorąc, instrumenty UPLC to systemy o mniejszej dyspersji, mniejszej głośności (dodatkowa kolumna), które mogą pracować przy wyższych ciśnieniach.? W przeciwieństwie do UPLC, nazwa nie jest znakiem towarowym i może odnosić się do systemów wielu producentów. Systemy UHPLC zostały zaprojektowane z myślą o niskiej głośności. Komentarz: Dwell volume to termin, który odnosi się do separacji gradientu; dodatkowa objętość kolumny i dyspersja są lepszymi terminami do użycia. UPLC mają mniejszą objętość, ale dzieje się tak dlatego, że objętość pozakolumnowa jest zminimalizowana. Niski poziom głośności nie jest jedynym atrybutem wydajności systemu UPLC. Oferują one wyższe wskaźniki wydajności niż systemy UPLC, choć są również podatne na zablokowanie. Komentarz: Nie wiem skąd to się bierze. Jeśli próbka nie jest prawidłowo przygotowana, możliwe jest zatkanie kolumny UHPLC lub UPLC o grubości poniżej 2 mikronów. To kolumna może zostać zatkana, a nie system. Artykuł UHPLC lub Core-Shell, który jest zwycięzcą? szczegółowo omawia zalety systemów względnych.

do czego służą systemy UPLC i UHPLC?

UPLC i UHPLC zostały wykorzystane do wielu celów, w tym prawnych, farmaceutycznych i medycznych. Systemy te są również ważnymi narzędziami w dziedzinie badań i produkcji. Bez HPLC, UPLC i UHPLC naukowcy mieliby trudności z wykryciem obecności leków zwiększających wydajność w próbkach dostarczanych przez sportowców, podczas gdy wykrywanie poziomu witaminy D w surowicy krwi zajęłoby znacznie dłużej niż dzisiaj. Komentarz: szybkość, rozdzielczość i czułość instrumentów UHPLC i UPLC sprawiają, że idealnie nadają się do użytku z MS. Przystępność cenowa i łatwość użycia nowej generacji instrumentów MS sprawia, że LC-MS jest bardziej praktyczny dla większej liczby laboratoriów.

technologie te stanowią zatem ważny krok naprzód. Oczywiście, w trakcie czytania tego artykułu opracowywane są jeszcze szybsze i dokładniejsze technologie. Jednak na razie systemy UPLC i UHPLC pozostają w czołówce wielu przedsięwzięć naukowych.

Ostatnio postępy zarówno w oprzyrządowaniu analitycznym, jak i stacjonarnej chemii fazowej doprowadziły chromatografów do ponownej oceny systemów i metod, z których korzystają na co dzień. Artykuł Optimising Core-Shell UHPLC Columns for Improving Protein and Peptide separation zajmuje się tym bardziej szczegółowo.

*zmiany w kolorze czerwonym
Waters Corporation
34 Maple Street
Milford
MA 01757
USA