wykorzystaliśmy VIROBIOM HIV, w szczególności białko otoczki gp120, do identyfikacji silnie działających peptydów aktywnych receptorami, które działają jako funkcjonalni antagoniści wielu receptorów chemokin. Udało się to osiągnąć poprzez wyszukiwanie sekwencji gp120 w poszukiwaniu małych lokalnych homologii do znanych peptydów sygnalizacyjnych, takich jak neuropeptydy z rodziny VIP/PACAP/GHRH .

zidentyfikowaliśmy dyskretną domenę oktapeptydową (miejsce peptydowe T) w pobliżu łodygi v2 gp120 i pokrewnych peptydów pochodzących z tych sekwencji, które preferencyjnie blokują infekcję izolatów wirusa HIV R5-tropowych . Nasze wstępne badania wykorzystywały wczesny pasażowy izolat pacjenta, który później wykazał fenotyp receptora R5 / X4 (podwójnego tropiku), chociaż żaden z receptorów chemokin Ani znaczenie wykorzystania receptora chemokin nie były znane w czasie tej pracy (około 1985). Dominujące działanie przeciwwirusowe izolatów wirusa HIV R5 vs X4 wyjaśnia wczesne kontrowersje związane z brakiem efektów przeciwwirusowych w przypadku izolatów przystosowanych do X4 lab.

podczas gdy peptyd t był pierwszym przeciwwirusowym receptorem skierowanym na HIV (klasa ta została nazwana „inhibitorami wejścia”), ponieważ epidemia AIDS rozszerzyła się w połowie lat 80-tych, stało się oczywiste, że wirus, podczas ustanawiania infekcji w OUN, nie replikował się w neuronach. Niemniej jednak odnotowano Głębokie deficyty poznawcze i motoryczne, co dodatkowo potęgowało wielkie piętno i cierpienie tej niesionej w tym czasie choroby. W naszych początkowych raportach zauważyliśmy korową dystrybucję wiązania gp120 z receptorami w mózgu naczelnych i postawiliśmy hipotezę, że zabijanie gp120 wrażliwych neuronów wyjaśniałoby obserwowane u pacjentów deficyty poznawcze. Zaproponowaliśmy, że peptyd T poprzez blokowanie wiązania gp120, później wykazanego w CCR5, będzie skuteczny w zapobieganiu utracie neuronów w zakażeniu HIV, o którym wiadomo, że występuje bardzo wcześnie po zakażeniu.

korzyści w neuroinflammacji i neurodegeneracji

wstępne badania, które wykazały peptyd T i jego odporny na degradację analog d-ala1-peptyd t-amide (DAPTA), były Ochronne dla neurotoksycznego działania gp120 w kulturach neuronalnych , częściowo poprzez uwalnianie ochronnych chemokin . Neuro-ochronne działanie DAPTA wykazano również u zwierząt leczonych gp120, gdzie utrata synaps i drzewostanu dendrytycznego wraz z opóźnieniami behawioralnymi zostały odwrócone . W związku z tym wykazano, że neurotoksyczne działanie gp120 jest przyczyną utraty neuronów korowych i patologii dendrytycznych w chorobach neuro-AIDS. Mechanizmy neurotoksyczności gp120 były stopniowo ujawniane przez nas i innych jako pośrednie i związane z aktywacją mikrogleju przez gp120, efekty, które są blokowane przez DAPTA . Aktywowany mikroglej i astrocyty są obecnie dobrze doceniane jako mediatory w różnych neuropatologiach, które analogi peptydowe T mogą leczyć.

chociaż działanie przeciwwirusowe tych peptydów było początkowym przedmiotem badań, stopniowo stało się jasne, że peptydowa rodzina peptydów t miała użyteczne działanie immunomodulujące i oszczędzające neurony poza HIV, które można wykorzystać terapeutycznie, zwłaszcza w Warunkach neurodegeneracyjnych z patogenezą zapalną. DAPTA obniżył cytokiny M1 IL-1, Il-6, IL-8, IL-23, TNFa i wzmocnił cytokiny m2, takie jak IL-4 i IL-10 . Niektóre przykłady możliwych korzyści leczenia DAPTA obejmują chorobę Alzheimera , neuropatie o różnym pochodzeniu , ból nowotworowy, ekscytotoksyczność i udar mózgu/niedokrwienie mózgu . Wykazano korzyści kliniczne dla neuro-AIDS (poniżej), supresji hormonu wzrostu, przyczyny opóźnień rozwojowych w pediatrycznym HIV, który przywrócił DAPTA, a także w chorobach skóry niezwiązanych z HIV, takich jak łuszczyca .

wyniki badań klinicznych w neuro-aids

peptyd T, lub bardziej poprawnie DAPTA, wszedł do badań klinicznych na ludziach dla punktów końcowych neuro-AIDS w 1986 roku. Następnie zgłoszono poprawę w skanach mózgu MRI i testach poznawczych . Korzyści poznawcze w neuro-AIDS zostały potwierdzone w dalszych kontrolowanych badaniach, które wykazały znaczącą grupę (aktywny vs. placebo, p=.003) i czas (p=.001) skutki, Brak jakichkolwiek działań toksycznych. Na początku lat 90-tych przeprowadzono trójstopniowe badanie DBPC u 215 randomizowanych pacjentów otrzymujących dapta w aerozolu do nosa (2 mg, TID). głównym punktem końcowym była zmiana globalnego wyniku poznawczego po 6 miesiącach w zestawie 23 testów. Podczas gdy nie stwierdzono znaczącej różnicy między grupą DAPTA a grupą placebo w zakresie globalnego wyniku poznawczego, 2 z 7 domen, pamięci roboczej (str. 04) i szybkości przetwarzania informacji (p=.008), wykazały poprawę w grupie DAPTA. Odnotowano również efekt leczenia u pacjentów, u których liczba komórek CD4 wynosiła powyżej 200 komórek/µL na początku badania (bez AIDS).

Ogólnie rzecz biorąc, ta kohorta była w minimalnym stopniu upośledzona poznawczo (MMSE=28). Jednak wśród osób z większym i klinicznie istotnym deficytem poznawczym>0.5 w skali globalnej Z-score, zaplanowana wcześniej analiza podgrup wykazała, że DAPTA wiązała się z poprawą wydajności, podczas gdy pogorszenie występowało częściej w grupie placebo (P=.02) . Chociaż pomiary przeciwwirusowe nie były pierwszorzędowym punktem końcowym w tym badaniu, dane te zostały zgłoszone i wykazały, że produkt DAPTA zmniejszał miano wirusa (-0, 54 log, p<.03) . Stwierdzenie działania przeciwwirusowego w tym badaniu jest godne uwagi, ponieważ pacjenci nie zostali włączeni na podstawie miana wirusa, nie stwierdzono optymalizacji dawki dla działania przeciwwirusowego, ich fenotypy wirusowe R5 lub X4, które określałyby wrażliwość na działanie przeciwwirusowe, były nieznane, a ponieważ badanie przeprowadzono w epoce Pre-HAART, DAPTA był zasadniczo testowany w monoterapii.

badanie II Fazy DAPTA w wieku 15 lub 1.5 mg / dobę przez 4 tygodnie u dziewięciu osób zażywających dożylnie leki z demencją z wczesną AIDS również wykazywało poprawę sprawności neurokognitywnej po podaniu większej dawki w porównaniu z niższą dawką lub placebo (P<.05) . W kolejnym badaniu odnotowano korzyści z obrazowania czynnościowego mózgu u 39-letniego mężczyzny z kompleksem otępienia AIDS, który otrzymywał 12 tygodni donosowego produktu DAPTA (0,4 mg 3 razy na dobę, 1,2 mg na dobę). Badanie to wykazało , że 34 Z 35 regionów mózgu o niskiej aktywności FDG wykazało remisję po terapii, zgodną z MRI i korzyściami poznawczymi zidentyfikowanymi w badaniach fazy 1 i 2. (op.cit., powyżej).

peptydy aktywne doustnie

podczas gdy DAPTA jest zasadniczo chroniony przed degradacją w osoczu, jest szybko trawiony w żołądku . Ponadto jego zastosowanie kliniczne było głównie przez aerozol do nosa, który wymaga długotrwałego przechowywania płynnego produktu leczniczego. Wykazano, że DAPTA traci aktywność poprzez agregację podczas przechowywania. Agregacja produktu leczniczego była problemem w badaniu DBPC, ponieważ przechowywany produkt był używany przez kilka lat, które zajęło Ukończenie badania, a pacjenci zgłaszali żelowanie badanych leków. To ogranicza dalszy rozwój kliniczny produktu DAPTA. Aby pokonać tę istotną przeszkodę, stworzyliśmy analog DAPTA (RAP-103), który jest w pełni chroniony przed degradacją i zachowuje siłę pikomolarną.

badanie proof-of-concept na szczurach wykazało, że doustne podawanie RAP-103 (0.05-1mg / kg) przez 7 dni w pełni zapobiega allodynii mechanicznej i hamuje rozwój hiperalgezji termicznej po częściowym podwiązaniu nerwu kulszowego u szczurów . W tym badaniu wykazaliśmy ponadto, że DAPTA i RAP-103 blokują zarówno CCR2, jak i blisko spokrewniony receptor chemokin CCR5. Co więcej, RAP-103 może zmniejszać rdzeniową aktywację mikroglialną i naciek monocytów oraz hamować zapalne odpowiedzi cytokin wywołane przez uszkodzenie nerwów obwodowych, przyczynę bólu neuropatycznego.

nasze wyniki sugerują, że celowanie w CCR2/CCR5 powinno zapewniać większą skuteczność niż celowanie w same CCR2 lub CCR5, oraz że podwójny antagonista funkcyjny CCR2 / CCR5 RAP-103 ma potencjał do klinicznego zastosowania w neuropatycznych i innych dolegliwościach bólowych. Ponieważ ten analog ma wiele mechanizmów DAPTA, które zmniejszają aktywację mikroglityczną, przesuwają równowagę cytokin, chronią neurony i oszczędzają drzewko dendrytyczne, jest głównym kandydatem do dalszego rozwoju klinicznego w wielu już omówionych warunkach neuroinflammacyjnych, dla których wykazano korzyści w przedklinicznych modelach testowania na zwierzętach, jak zauważono w wielu cytowaniach tego przeglądu.