Autor: AcceGen R&zespół D

pochodzenie komórek Vero komórki vero

komórki Vero są uznawane przez Światową Organizację Zdrowia (WHO) i chińską Farmakopeę w produkcji szczepionek. Komórki Vero, znane również jako komórki nerkowe afrykańskiej zielonej małpy, zostały oficjalnie wyizolowane z nerek afrykańskiej zielonej małpy przez japońskich uczonych Yasumura Y i Kawakita y w 1962 roku. Była to pierwsza komórka zależna od aneuploidy używana do produkcji ludzkich produktów biologicznych i tworzenia linii komórkowych i banku komórek różnych pokoleń w tym samym czasie.

związek między komórkami Vero a szczepionkami wirusowymi

szczepionki wirusowe były szeroko stosowane w zapobieganiu wielu chorobom, w tym wściekliźnie, grypie i ospie. Jednak szczepionki nadal nie są dostępne dla zagrożonych populacji na obszarach endemicznych, koszt szczepionki i ogromne zapotrzebowanie na całym świecie są głównymi przeszkodami dla sprawiedliwego i globalnego stosowania szczepionek wirusowych dla ludzi.

komórki Vero mogą być stosowane do produkcji szczepionek od żywych szczepionek przeciwko rotawirusom, przez żywe atenuowane szczepionki przeciw grypie, aż po rozwój inaktywowanych szczepionek przeciwko całemu wirusowi. Komórki Vero nie mogą wykazywać ekspresji przeciwwirusowego interferonu białkowego z powodu wrodzonych wad genetycznych. Dlatego też, szeroka wrażliwość komórek Vero sprzyjała rozwojowi produkcji szczepionek z wykorzystaniem komórek Vero jako substratu.

komórki Vero mają następujące zalety w porównaniu z pierwotnymi i diploidalnymi liniami komórkowymi do produkcji produktów biologicznych. Po pierwsze, bank Komórek jest łatwy do ustanowienia i zachowania, a jednocześnie może być stale przechodzony z szybkim tempem wzrostu. Po drugie, komórki Vero mają stabilne cechy genetyczne i niskie prawdopodobieństwo złośliwości. Po trzecie, komórki Vero są wrażliwe na różne wirusy i mają wysokie miana wirusów. Wreszcie, komórki Vero mogą być wyjątkowo odporne na różne warunki kulturowe, a wymagania nie są wysokie, że mogą dobrze rosnąć na powierzchni mikrocarriera, co dowodzi, że komórki Vero mają znaczną wartość w rozwoju serii szczepionek wirusowych.

Jak hodować przylegające komórki Vero

wzrost komórek Vero jest zależny od zakotwiczenia, a komórki Vero mogą rozmnażać się tylko wtedy, gdy mają odpowiednią powierzchnię. Przylegające komórki Vero hodowano oddzielnie w MEM, Medium 199 i dmem uzupełnionym 10% FBS Pod 5% CO2 i 37℃ kultur. Naukowcy odkryli, że komórki Vero, najwyższe stężenie komórek osiągnęło 25,6 ± 1,1 × 104 komórki / cm2 w grupie DMEM + FBS, która wzrosła o 50,1% w porównaniu do grupy MEM + FBS i 89,6% grupy m199 + FBS (rys. 1).

rys. 1. Porównanie wzrostu komórek Vero w różnych pożywkach hodowlanych (N = 5)

poza tym więcej sferoidalnych martwych komórek znaleziono w grupie pożywek M199 + FBS. Podsumowując, średnia Grupa dmem + FBS jest bardziej odpowiednia do wzrostu komórek Vero i ostatecznie została wybrana do dalszych badań (figuer2).

rys. 2. Zdjęcia wzrostu komórek Vero w różnych mediach w dniu 4, (1) MEM+FBS, (2) M199+FBS, (3) DMEM+FBS

FBS może dostarczyć komórkom Vero niezbędnych substancji do hodowli przywiązania in vitro, takich jak czynniki przywiązania, czynniki wzrostu i hormony, które mogą zapewnić stabilne środowisko in vitro i promować wzrost komórek o wysokiej gęstości.

serum jest jednak złożoną mieszaniną pierwiastków, a jego składniki nie są całkowicie jasne. Dlatego zastosowanie surowicy w technologii hodowli komórkowej ma wiele wad, które zwiększają niestabilność procesu produkcji szczepionki i trudności w kontroli jakości szczepionki. Naukowcy zaczęli wykorzystywać surowicę bez komórek zwierzęcych, aby zastąpić tradycyjne surowice bydlęce, co stało się istotnym trendem rozwojowym w produkcji szczepionek wirusowych.

adaptacja przylegających komórek Vero do wzrostu zawiesiny w IPT-AFM

zastosowanie: Zastosowanie nowej linii zawiesinowej Vero cell w połączeniu z IPT-AFM, opracowanym przez siebie pożywką niezawierającą składników zwierzęcych w znacznym stopniu przyczyni się do obniżenia kosztów szczepionki.

przylegające komórki Vero początkowo hodowano w minimalnym pożywce zasadniczej (mem) uzupełnionej 10% FBS lub IPT-AFM (opracowanym przez siebie pożywce bez składników zwierzęcych). Hodowlę komórek zastosowano jako kolbę do wstrząsania przegrodą o gęstości wysiewu 7×104 komórki / cm2, następnie komórki zakażono przy MOI 0,1, bez przechodzenia do wymiany średniej.

w przypadku hodowli zawiesinowej, obok IPT-AFM przebadano pięć komercyjnych mediów wolnych od surowicy/zdefiniowanych chemicznie. Komórki Vero stosowały trzy różne metody (rys. 3), następnie komórki monitorowano codziennie wśród parametrów kinetycznych. W celu oceny żywotności komórki zabarwiono błękitem trypanowym (0,2% (w / v) w soli fizjologicznej buforowanej fosforanem (PBS). Ich wyniki pokazują, że zawieszone komórki Vero rosły najlepiej w trzeciej hodowli, jak pokazano na fig.4, a komórki Vero były w stanie rosnąć w zawiesinie w IPT-AFM.

rys. 3. Adaptacja przylegających komórek Vero do hodowli zawiesinowej zgodnie z trzema protokołami.

figure4. Wzrost komórek Vero przystosowanych do hodowli zawiesiny w kolbach wstrząsających według 3 różnych protokołów (dane z 12 fragmentów).

podsumowanie

głównym obszarem zastosowania technologii podłoża do hodowli komórek Vero był rozwój i produkcja szczepionek wirusowych. Wytwarzanie szczepionek z wykorzystaniem komórek Vero jako matrycy poprawiło Bezpieczeństwo i kontrolę jakości produktu.

w przyszłości komórki Vero mogą być wykorzystywane do opracowywania i stosowania obecnych szczepionek przeciw koronawirusowi (covid-19). Wirus COVID – 19 może uczyć się z doświadczeń związanych z opracowaniem szczepionek przeciwko wirusowi wścieklizny z wykorzystaniem komórek Vero, które sprawiły, że komórki Vero przekształciły przylegający stan w hodowlę zawiesinową (hodowla bez surowicy). Skuteczność infekcji i miano wirusa wykryto po transfekcji wirusami COVID-19.

AcceGen Vero Cell Line

accegen cultures and provides the African green monkey kidney cell line — Vero, Vero (AC-free), Vero 76. Aby uzyskać więcej szczegółowych informacji, odwiedź naszą stronę internetową lub skontaktuj się z [email protected]

1. Yasumura Y KY: badania nad SV40 w hodowli tkankowej-wstępny etap badań nad rakiem in vitro. Nihon rinsho 1963, 21: 1201-1215.

2. Barrett PN, Terpening SJ, Snow D, Cobb RR, Kistner O: Technologia Vero cell umożliwiająca szybki rozwój inaktywowanych szczepionek całych wirusów na nowo pojawiające się choroby wirusowe. Ocena ekspertów szczepionek 2017, 16(9): 883-894.

3. Khaled Trabelsi MBZ, Héla Kallel: Purification of rabies virus produced in Vero cells grown in serum free medium. szczepionka 2019.

4. Shen CF, Guilbault C, Li X, Elahi SM, Ansorge S, Kamen a, Gilbert R: opracowanie zawiesiny dostosowanej technologii procesu hodowli komórek Vero do produkcji szczepionek wirusowych. Szczepionka 2019, 37 (47): 6996-7002.

5. Orr-Burks N, Murray J, Wu w, Kirkwood CD, Todd KV, Jones L, Bakre a, Wang H, Jiang B, Tripp RA: Gene-edited vero cells as rotavirus vaccine substrats. Szczepionka: X 2019, 3: 100045.

6. Yang J, Guertin P, Jia G, LV z, Yang H, Ju D: wielkoskalowa hodowla komórek hek293t i komórek Vero w bioreaktorach jednorazowego użytku. AMB Express 2019, 9(1):70.

7. Samia Rourou MBZ, Héla Kallel: Adaptation of Vero cells to suspension growth for rabies virus production in different surowica free media. Szczepionka 2019.