wysoce skuteczną metodą transferu genów do komórek ssaków jest zakażenie wektorami retrowirusowymi. Skuteczność infekcji retrowirusowej jest znacznie zwiększona, 100 do 1000 razy w niektórych komórkach, poprzez włączenie polibrenu podczas infekcji. Polibren z szokiem DMSO jest również używany do pośredniczenia transferu DNA do różnych typów komórek, takich jak CHO, fibroblasty zarodków kurzych, NINH-3T3 i komórki mieloidalne.
protokół: Zakażenie retrowirusowe
rekombinowane zapasy retrowirusowe Wytwarza się przez dodanie 5 ml pożywki wzrostowej z 5% surowicą do prawie zbiegającej się monowarstwy transfekowanych retrowirusowych komórek opakowaniowych w płytce 100 mm. Po 24 godzinach medium jest usuwane i filtrowane przez filtr 0,45 um.
komórki, które mają być zakażone tym zrekombinowanym retrowirusem, są platerowane 500 000 komórek na płytkę 100 mm w 10 ml kompletnego pożywki.
24 godziny później usuń podłoże wzrostu z komórek. Infekować komórki 2 ml supernatantu wirusa (lub rozcieńczeniem materiału wirusa do 2 ml) w obecności 5UG do 10ug polibrenu na ml (stężenie końcowe). Inkubować komórki przez 3 do 6 godzin w temperaturze 37°C.
Dodać 8 ml pełnego pożywki. Trzy dni po zakażeniu Podziel komórki 1: 5 na pożywkę selekcyjną.

Toyoshima, K. and Vogt, P. K., 1969. Wirusologia. 38: 414-426
Coelen, J. R., Jose, D. G. and May, J. T. 1983. Arch. Virol. 75: 307-311
protokół: transfekcja
komórki płytki przy około 50% zbiegu w ośrodku wzrostu całkowitego.
18 do 24 godzin po pokryciu, przygotować roztwór DNA-Medium-Polibrenu, bezpośrednio przed użyciem w następujący sposób:
uwaga: każdy składnik musi być dodany w odpowiedniej kolejności.
1.: kompletne podłoże wzrostu (2 ml dla płytki 60 mm i 3 ml dla płytki 100 mm) ogrzane do 37°C.
2.: plazmid DNA, 10ng do 10ug. Delikatnie wymieszać.
3.: Polibren do końcowego stężenia 5UG do 10ug na ml. Delikatnie wymieszać
usunąć podłoże z płytki i dodać do komórek roztwór DNA-Medium-Polibrenu. Inkubować komórki w temperaturze 37°C przez 6 do 20 godzin, okazjonalnie delikatnie kołysając się co około 1.5 godzin przez pierwsze 6 godzin.
usunąć roztwór DNA-Medium-Polibrenu i delikatnie nałożyć komórki roztworem szokowym DMSO (15% DMSO w 1X HBSS: Katalog mediów specjalnych #s-051-D) 3mls na naczynie 60mm i 4mls na płytkę 100mm. Ręcznie kołysać naczynie przez 10 sekund, aby równomiernie rozprowadzić roztwór, a następnie inkubować komórki dokładnie przez 4 minuty w temperaturze 37°C.
natychmiast wyjąć roztwór szokowy DMSO i delikatnie przepłukać komórki dwukrotnie kompletnym pożywką wzrostu, 5 ml na pranie na naczynie 60 mm, 10 ml na pranie na naczynie 100 mm
Dodać do komórek kompletny pożywkę wzrostu.
dla stabilnych transformantów, usuń podłoże wzrostu i Podziel komórki 1:5 na podłoże selekcyjne.
Aby uzyskać przemijającą ekspresję, usuń podłoże wzrostu i dodaj świeże podłoże wzrostu. Zbierz komórki i / lub pożywkę po 24 do 72 godzinach.

Chaney, W. G. et al., 1986. Genetyka komórkowa somatyczna i molekularna. Vol. 12, nr 23,
237-244.
Aubin, R. J. et al. 1988. Genetyka komórkowa somatyczna i molekularna. Vol. 14, No.2, 155-167.
Chisholm, o. et al., 1998. Badania Nad Kwasami Nukleinowymi. Vol. 16, No.5, 2352
odczynnik jest dostarczany przefiltrowany przez membrany 0,2 um i uwodniony sterylnym H20.