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Escherichia coli O157:H7 stress e expressão de genes de virulência em alface utilizando comparativa de PCR em tempo real

focos de origem Alimentar atribuída à contaminação de produtos frescos com Escherichia coli O157:H7 são uma preocupação crescente. Em especial, os produtos hortícolas verdes folhosos, incluindo alfaces e espinafres, são susceptíveis de contaminação por água de irrigação, estrume e práticas de processamento e armazenamento de alimentos. A sobrevivência de E. coli O157:O H7 e a microflora natural em alfaces romenas armazenadas a 4 graus C e 15 graus C durante um período de 9 dias foram avaliadas por Contagem de placas. Um dois-passo reverso-transcrição comparativa PCR quantitativo em tempo real do ensaio foi utilizado para avaliar a expressão de genes que codificam a subunidade de Shiga-toxina 1 e 2 (stx1A e stx2A), intimin (eaeA), flagellin (fliC), sigmaS–o stress geral sigma factor (rpoS) e ferro superóxido dismutase (sodB) em E. coli O157:H7. Os resultados indicam que a redução da temperatura de armazenamento de 15 graus C para 4 graus C é significativa (P<0.05) reduziu o crescimento de Escherichia coli O157:H7 em alface Romaine, no entanto, as populações viáveis permaneceram após o final de ambos os períodos de armazenagem. No final do período de armazenamento, observou-se uma diminuição de 0, 430 e 0, 180 log na E. coli O157:H7 a 4 graus C e 15 graus C, respectivamente. Sob ambas as temperaturas de armazenamento, a contagem total de placas aeróbias aumentou durante a experiência. Foi observado um aumento da expressão de E. coli O157:H7 vezes com stx2A. Embora o stx1A exibisse upregulação para todas as condições de armazenamento, a expressão do gene variável foi observada durante todo o período de armazenamento. Além disso, fliC foi regulado durante o armazenamento a 15 graus C, enquanto a transcrição a 4 graus C foi alterada apenas ligeiramente. A expressão da eaeA foi variável a 15 graus C com uma tendência para baixo-regulação, no entanto, este gene foi ligeiramente regulado para cima quando armazenado a 4 graus C. Uma ligeira regulação de rpoS e sodB também foi observada a 4 graus C. Em conclusão, os nossos resultados sugerem E. coli O157:H7 pode tornar-se mais virulento com armazenamento prolongado de alface-romana, particularmente quando armazenado a temperaturas refrigeradas.