temos explorado o HIV virobiome, especificamente a proteína do envelope gp120, para identificar altamente potente de receptores de peptídeos ativos que agem como funcional antagonistas de vários receptores de quimiocinas. Isto foi realizado através da busca da sequência gp120 para pequenas homologias locais para os peptídeos sinalizadores conhecidos, como os neuropeptídeos da família VIP/PACAP/GHRH .

identificámos um discreto domínio octapeptídeo (sítio peptídeo T) próximo do tronco V2 de gp120 e péptidos relacionados derivados destas sequências que bloqueiam preferencialmente a infecção de isolados de VIH com tropismo R5 . Os nossos estudos iniciais utilizaram um isolado de um paciente de passagem precoce, que mais tarde demonstrou ter um fenótipo do receptor R5 / X4 (com tropismo duplo), embora nenhum dos receptores de quimioquina, nem o significado da utilização do receptor de quimioquina, fossem conhecidos na altura deste trabalho (cerca de 1985). O efeito antiviral predominante para isolados de VIH R5 vs X4 explica a controvérsia inicial relacionada com a falta de efeitos antivirais com isolados adaptados do Laboratório X4 . enquanto o peptídeo T foi o primeiro receptor anti-viral para o HIV (esta classe passou a ser chamada de “inibidores de entrada”), como a epidemia de AIDS se expandiu em meados da década de 1980, tornou-se evidente que o vírus, ao estabelecer a infecção no SNC, não se replicou nos neurônios. No entanto, foram relatados profundos déficits cognitivos e motores, somando-se ao grande estigma e sofrimento que esta doença carregava na época. Em nossos relatórios iniciais, observamos uma distribuição cortical da gp120 ligando-se aos receptores no cérebro primata e hipotetizamos que a morte gp120 de neurônios suscetíveis explicaria os déficits cognitivos observados nos pacientes. Nós propusemos que o peptídeo T, ao bloquear a ligação gp120 , mais tarde mostrado estar em CCR5 , seria eficaz na prevenção da perda neuronal na infecção pelo HIV, agora conhecida por ocorrer muito cedo após a infecção.

Benefícios em neuroinflammation e neurodegeneration

Inicial de estudos que mostraram peptídeo T, e sua degradação resistente analógico D-ala1-peptídeo T-amida (DAPTA), era de proteção para os efeitos neurotóxicos da gp120 em neuronal culturas , em parte, pela liberação de proteção quimiocinas . Os efeitos neuro-protectores do DAPTA também foram mostrados em animais tratados com gp120, onde a perda de sinapses e arbor dendrítico, juntamente com atrasos comportamentais, foram revertidos . Os efeitos neurotóxicos da gp120 foram, portanto, mostrados como uma causa de perda neuronal cortical e patologias dendríticas em neuro-AIDS. Os mecanismos da neurotoxicidade gp120 foram gradualmente revelados por nós e outros como indiretos , e relacionados com a ativação da microglia pela gp120, efeitos que são bloqueados pela DAPTA . Microglia ativada e astrócitos são agora bem apreciados por serem mediadores em diversas neuropatologias, que os análogos peptídicos T podem tratar.embora as acções anti-virais destes peptídeos tenham sido objecto de investigação inicial, tornou-se gradualmente claro que a família peptídica T dos peptídeos tinha efeitos imunomoduladores e poupadores neuronais úteis para além do VIH que podiam ser explorados terapeuticamente, especialmente em condições neurodegenerativas com uma patogénese inflamatória. O DAPTA reduziu as citoquinas M1 IL-1, Il-6, IL-8, IL-23, TNFa e aumentou as citoquinas M2 tais como IL-4 e IL-10 . Alguns exemplos de possíveis benefícios do tratamento do DAPTA incluem doença de Alzheimer , neuropatias de origem diversa , dor cancerosa , excitotoxicidade e acidente vascular cerebral/isquemia cerebral . Os benefícios clínicos têm sido mostrados para neuro-AIDS (abaixo), supressão da hormona de crescimento, uma causa de atrasos no desenvolvimento do HIV pediátrico , que DAPTA restaurou, bem como em condições cutâneas não relacionadas com o HIV, como psoríase .

os resultados dos ensaios clínicos em neuro-SIDA

Peptídeo T, ou mais correctamente DAPTA, entraram em ensaios clínicos em seres humanos para os objectivos da neuro-SIDA em 1986. Foram subsequentemente notificadas melhorias nos exames de ressonância magnética cerebral e nos testes cognitivos . Os benefícios cognitivos nos neuro-SIDA foram confirmados em testes controlados adicionais, que mostraram grupo significativo (activo vs. placebo, p=.003) e tempo (p=.001) efeitos, sem qualquer toxicidade. No início da década de 1990 foi realizado um ensaio DBPC com três locais em 215 indivíduos aleatorizados de pulverizador intra-nasal DAPTA (2 mg, TID). o principal parâmetro de avaliação foi a alteração na pontuação cognitiva global aos 6 meses numa bateria de 23 testes. Embora não tenha sido encontrada diferença significativa entre o DAPTA e o grupo placebo na pontuação cognitiva global, 2 de 7 domínios, memória de trabalho (P. 04) e velocidade de processamento da informação (p=.008), apresentou melhorias no grupo DAPTA. Foi também notificado um efeito de tratamento para doentes cujo número de células CD4 era superior a 200 células/µL no início (não SIDA).globalmente, esta coorte estava minimamente cognitiva (MMSE=28). No entanto, entre aqueles com maior e clinicamente significativo déficit cognitivo>0.5 na escala global Z, Uma análise pré-planeada de subgrupos mostrou que o DAPTA estava associado a um melhor desempenho, enquanto a deterioração era mais comum no grupo placebo (P=.02) . Embora as medições anti-virais não tenham sido um objectivo primário neste ensaio, estes dados foram notificados e mostraram que o DAPTA reduziu a carga viral (- 0, 54 log, p<.03) . A constatação de um anti-viral efeito, neste estudo, é notável como os pacientes não foram inscritos com base na carga viral, não houve a otimização da dosagem de anti-viral efeito, a sua R5 ou X4 viral fenótipos que iria determinar a sensibilidade de um anti-viral efeito era desconhecido, e uma vez que o estudo foi feito no pré-HAART era, DAPTA foi essencialmente testado como monoterapia. um estudo de Fase 2 no hospital de DAPTA aos 15 ou 1.5mg / dia durante 4 semanas em nove consumidores de droga IV com demência precoce da SIDA também mostraram melhor desempenho neurocognitivo, na dose mais elevada em comparação com a dose mais baixa ou com o placebo (P<.05) . Num outro estudo, foram notificados benefícios na imagiologia funcional do cérebro num homem de 39 anos com complexo de demência da SIDA que recebeu 12 semanas de DAPTA intranasal (0, 4 mg TID, 1, 2 mg por dia). Este estudo demonstrou que 34 de 35 regiões cerebrais com baixa actividade de FDG apresentaram remissão após a terapêutica, consistente com os benefícios da ressonância magnética e cognitivos identificados nos estudos de Fase 1 e 2. (op. cit., acima). péptidos oralmente activos enquanto o DAPTA está substancialmente protegido da degradação plasmática, é rapidamente digerido no estômago . Além disso, o seu uso clínico tem sido principalmente por pulverização nasal, o que requer armazenamento de longo prazo de um medicamento líquido. DAPTA tem sido mostrado a perder a atividade por Agregação após o armazenamento. A agregação do medicamento foi uma preocupação no ensaio DBPC, uma vez que o produto armazenado foi utilizado durante os vários anos que levou a concluir o estudo e o abate da medicação do estudo foi notificado pelos doentes. Isto tem limitado o desenvolvimento clínico do DAPTA. Para superar este obstáculo significativo, criamos um análogo do DAPTA (RAP-103) que está totalmente protegido à degradação, e mantém a potência picomolar.

um estudo à prova de conceito em ratos demonstrou que a administração oral de RAP-103 (0.05-1mg / kg) durante 7 dias previne totalmente a alodinia mecânica e inibe o desenvolvimento da hiperalgesia térmica após ligação parcial do nervo ciático em ratos . Neste estudo, mostramos ainda que o DAPTA e o RAP-103 bloquearam tanto o CCR2 como o receptor quimiocino intimamente relacionado CCR5. Além disso, o RAP-103 pode reduzir a activação microglial espinhal e a infiltração monocitária e inibir as respostas inflamatórias às citocinas evocadas por lesão nervosa periférica, a causa da dor neuropática.

os nossos resultados sugerem que o alvo CCR2/CCR5 deve proporcionar maior eficácia do que o alvo CCR2 ou CCR5 isoladamente, e que o antagonista funcional duplo CCR2/CCR5 RAP-103 tem potencial para utilização clínica em condições neuropáticas e outras de dor. Porque analógico ações múltiplas DAPTA mecanismos para reduzir a ativação microglial, shift as citocinas equilíbrio, proteger os neurônios e de reposição dendríticas arbor, ele é um excelente candidato para posterior desenvolvimento clínico em vários neuroinflammatory condições já discutidas, para que os benefícios em pré-clínicos em animais modelos de teste foram mostrados, como observado em muitas citações desta revisão.