Autor: AcceGen R&a Equipe de D

A Origem de Células Vero

Vero células são reconhecidos pela Organização Mundial de Saúde (OMS) e Farmacopeia Chinesa na produção de vacinas. As células Vero, também conhecidas como células renais de macaco verde Africano, foram oficialmente isoladas dos rins de macaco verde Africano pelos estudiosos japoneses Yasumura Y e Kawakita Y em 1962. Foi a primeira célula dependente da aneuploidia usada na produção de produtos biológicos humanos e no estabelecimento de linhas celulares e banco de células de diferentes gerações ao mesmo tempo.

a relação entre as células Vero e as vacinas virais

As vacinas virais têm sido amplamente utilizadas na prevenção de muitas doenças, incluindo raiva, gripe e varíola. No entanto, as vacinas ainda não são acessíveis para as populações vulneráveis em áreas endémicas, o custo da vacina e a enorme necessidade mundial são os principais obstáculos para uma utilização equitativa e global das vacinas virais humanas.as células Vero podem ser aplicadas à produção da vacina, desde vacinas vivas contra o rotavírus até vacinas vivas atenuadas contra a gripe até ao desenvolvimento de vacinas inactivadas contra o vírus inteiro. As células Vero não podem expressar o interferão antiviral proteico devido aos seus defeitos genéticos inerentes. Por conseguinte, a ampla susceptibilidade das células Vero promoveu o desenvolvimento da produção de vacinas utilizando células Vero como substrato.as células Vero têm as seguintes vantagens em comparação com as linhas celulares primária e diplóide para a produção de produtos biológicos. Em primeiro lugar, o banco de células é fácil de estabelecer e preservar, ao mesmo tempo que pode ser continuamente passada com uma taxa de crescimento rápido. Em segundo lugar, as células Vero têm traços genéticos estáveis e uma baixa probabilidade de malignidade. Em terceiro lugar, as células Vero são sensíveis a uma variedade de vírus e têm elevados títulos de vírus. Finalmente, as células Vero poderiam ser extremamente resistentes a várias condições culturais, e os requisitos não são elevados de que possa crescer bem na superfície do microcarrier, o que prova que as células Vero têm um valor significativo no desenvolvimento de uma série de vacinas virais.

como cultura de células Vero aderentes

o crescimento de células Vero é dependente da fixação, e as células Vero só podem proliferar quando fornecidas com uma superfície adequada. As células Vero aderentes foram cultivadas separadamente em culturas MEM, Medium 199, e DMEM complementadas com 10% de FBS sob uma cultura de 5% de CO2 e 37℃. Os pesquisadores descobriram que as células Vero, a maior concentração de células atingiu 25,6 ± 1,1 × 104 células / cm2 no grupo DMEM + FBS, que aumentou 50,1% em comparação com o grupo MEM+FBS e 89,6% do grupo M199+FBS (Figura 1) .

Figura1. Comparação do crescimento de células Vero em diferentes meios de cultura (n=5)

além disso, mais células mortas esferoidais foram encontradas no grupo médio M199 + FBS. Em conclusão, o grupo médio DMEM + FBS é mais adequado para o crescimento de células Vero e foi finalmente selecionado para pesquisas subsequentes (figuer2).

a figura2. Imagens de crescimento de células Vero em diferentes meios no dia 4, (1) MEM+FBS, (2) M199+FBS, (3) DMEM+FBS

FBS pode fornecer às células Vero as substâncias necessárias para a cultura da ligação in vitro, tais como factores de ligação, factores de crescimento e hormonas, que podem proporcionar um ambiente estável in vitro e promover o crescimento de células de alta densidade.no entanto, o soro é uma mistura complexa de elementos e os seus componentes não são completamente claros. Portanto, o uso de soro na tecnologia de cultura celular tem muitas desvantagens, o que aumentou a instabilidade do processo de produção da vacina e a dificuldade de controle de qualidade da vacina. Os investigadores começaram a utilizar meios sem soro de células animais para substituir os meios de soro tradicionais bovinos, que se tornou uma tendência de desenvolvimento essencial para a produção de vacinas virais.adaptação das células Vero aderentes ao crescimento da suspensão na aplicação IPT-AFM

: A utilização de uma nova linha de células Vero de suspensão combinada com IPT-AFM, um meio desenvolvido internamente sem Componentes animais, contribuirá fortemente para reduzir o custo da vacina.as células Vero aderentes foram inicialmente cultivadas em meio essencial mínimo (MEM), complementadas com 10% de FBS ou IPT-AFM (um meio animal desenvolvido internamente sem componentes). A cultura de células foi utilizada como um frasco de agitação de baffle a uma densidade de semeadura de 7×104 células / cm2, em seguida, as células foram infectadas a um MOI de 0,1, sem proceder a uma troca média.para cultura de suspensão, foram testados cinco meios comerciais livres de soro/quimicamente definidos, ao lado do IPT-AFM. As células Vero estavam usando três métodos diferentes (Figura 3), então as células foram monitoradas diariamente entre os parâmetros cinéticos. Para avaliar a viabilidade, as células foram manchadas com azul de trypan (0, 2% (P/v) em solução salina tampão fosfato (PBS) . Seus resultados mostram que as células Vero suspensas estavam crescendo melhor na terceira cultura, como mostrado na Figura 4, e as células Vero foram capazes de crescer em suspensão em IPT-AFM.

Figueiraura3. Adaptação das células Vero aderentes à cultura de suspensão de acordo com os três protocolos.

Figura4. Crescimento de células Vero adaptadas à cultura de suspensão em frascos agitados de acordo com 3 protocolos diferentes (dados de 12 passagens).

conclusão

a principal área de aplicação da tecnologia de meio de cultura de células Vero foi o desenvolvimento e produção de vacinas virais. A produção de vacinas com células Vero como matriz melhorou a segurança e a controlabilidade da qualidade do produto.no futuro, as células Vero podem ser utilizadas no desenvolvimento e aplicação das actuais vacinas coronavírus (COVID-19). O vírus COVID-19 pode aprender com a experiência do desenvolvimento de vacinas contra o vírus da raiva utilizando células Vero, o que fez com que as células Vero transformassem o Estado aderente em cultura de suspensão (cultura sem soro). A eficácia da infecção e o título do vírus foram detectados após transfecção com vírus COVID-19.

AcceGen Vero Cell Line

AcceGen cultures and provides the African green monkey kidney cell line-Vero, Vero (AC-free), Vero 76. Para informações mais detalhadas, visite o nosso site ou entre em contato [email protected] 1. Yasumura Y KY: Studies on SV40 in tissue culture-preliminary step for cancer research in vitro. Nihon rinsho 1963, 21: 1201-1215.2. Barrett PN, Terpening SJ, Snow D, Cobb RR, Kistner O: Vero cell technology for rapid development of inactivated whole virus vaccines for emerging viral diseases. Expert Review of Vaccines 2017, 16 (9):883-894.3. Khaled Trabelsi MBZ, Hela Kallel: Purification of rabies virus produced in Vero cells grown in serum free medium. vacina 2019.4. Shen CF, Guilbault C, Li X, Elahi SM, Ansorge S, Kamen a, Gilbert R: desenvolvimento de uma tecnologia de processo de cultura de células Vero adaptada à suspensão para a produção de vacinas virais. Vacina 2019, 37 (47):6996-7002.5. Orr-Burks N, Murray J, Wu W, Kirkwood CD, Todd KV, Jones L, Bakre a, Wang h, Jiang B, Tripp RA: células vero editadas por genes como substratos da vacina contra rotavírus. Vacina: X 2019, 3:100045.6. Yang J, Guertin P, Jia G, Lv Z, Yang H, Ju D: cultura em grande escala de microcarriladores de células HEK 293T e células Vero em biorreactores de uso único. AMB Express 2019, 9 (1): 70.7. Samia Rourou MBZ, Hela Kallel: adaptação das células Vero ao crescimento da suspensão para a produção do vírus da raiva em diferentes meios serológicos livres. Vacina 2019.