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infecções do tracto respiratório inferior são a principal causa de hospitalização relacionada com doenças infecciosas nos Estados Unidos (13). Determinamos previamente a frequência de infecções virais específicas associadas a condições agudas do trato respiratório que levam a hospitalizações (5). Os doentes inscritos no estudo foram admitidos num hospital público ou privado e as infecções por vírus respiratórios foram identificadas por cultura celular e estudos serológicos. Uma vez que o número de infecções por vírus respiratórios associadas a doenças respiratórias pode ser aumentado através da aplicação de testes de transcrição reversa-PCR (RT-PCR) (3, 6), aplicamos estes testes a espécimes colhidos e reservados para este efeito durante um período de 2 anos para determinar se outras infecções por vírus respiratórios poderiam ser identificadas neste coorte.os detalhes do estudo clínico foram descritos anteriormente (5). Brevemente, participantes do estudo foram pessoas de todas as idades que foram hospitalizadas no Ben Taub General Hospital OU St.Luke’s Episcopal Hospital em Houston, TX, com uma condição respiratória aguda (pneumonia, traqueobronquite, bronquiolite, crupe, exacerbações de asma ou doença pulmonar obstrutiva crônica , ou insuficiência cardíaca congestiva). Foram colhidas amostras respiratórias (esfregaço nasal ou de garganta) e séricas num período médio de 1 dia de hospitalização. Este estudo foi realizado sobre os participantes inscritos de 1 de setembro de 1993 até ao final do estudo em maio de 1995. A amostra respiratória foi misturada com caldo para perfusão de vitela como estabilizador na altura da colheita, transportada para o laboratório em gelo húmido e inoculada em cultura celular. A amostra restante foi aliquotada e congelada a <-70°C até ser testada utilizando ensaios moleculares (descritos abaixo). Em geral, as amostras foram submetidas a um ou dois degelos para gerar cDNA para testes iniciais. Uma amostra de soro de fase convalescente foi obtida 14 a 42 dias depois. Todos os sujeitos deram consentimento informado ao abrigo de um protocolo aprovado pelo Conselho Institucional de revisão do Baylor College of Medicine.os métodos utilizados para a cultura celular e a serologia foram descritos anteriormente (5). Os ensaios de cultura de células foram testados para os vírus da gripe de tipo A e B, vírus de parainfluenza (PIV) dos tipos 1 a 3, vírus sincicial respiratório (RSV), rinovírus, enterovírus, herpesvírus e adenovírus. Testes serológicos foram realizados como descrito anteriormente (5) em amostras de soro emparelhadas para vírus influenza A e B, tipos PIV 1 a 3, RSV, e Coronavirus 229E e OC43.os ensaios RT-PCR foram realizados utilizando ensaios RT-PCR em tempo real previamente descritos para os vírus influenza A E B e coronavírus OC43 e 229E (3). Os tipos PIV 1 a 3 (PIV1, PIV2 e PIV3, respectivamente), RSV, metapneumovírus humano (HMPV), e infecções por picornavírus foram identificados utilizando testes de RT-PCR previamente descritos, seguidos de hibridização blot meridional (3). As amostras positivas ao picornavírus foram ainda classificadas utilizando testes de RT-PCR em tempo real específicos ao rinovírus e ao enterovírus, quando permaneceu uma amostra suficiente para estes testes (8, 11).um total de 403 doenças distintas ocorreram durante o período de estudo de 2 anos em 364 pessoas. Setenta e seis vírus respiratórios (excluindo o vírus herpes simplex e o citomegalovírus ) foram isolados a partir de 75 amostras de doenças recolhidas durante o período de estudo. Estes incluíram 26 picornavírus, 21 RSV, 19 vírus influenza, 4 adenovírus, e 2 cada um dos PIV1, PIV2, e PIV3 (Tabela 1). Trinta doenças (de 136 soros emparelhados testados) também tiveram 33 infecções identificadas por serologia, 11 das quais foram identificadas por cultura (6 influenza A Subtipo H3N2 , 4 RSV e 1 influenza B). Infecções adicionais identificados por sorologia, mas não pela cultura incluiu sete A/H3N2, três de cada um dos RSV, PIV2, PIV3, e OC43, e um de cada UM/H1N1, PIV1, e 229E.