syntyi ja kasvoi Cincinnatissa Ohiossa, ja Rudy aloitti laulamisen kirkossa jo nuorena. Teini-iässä hän lauloi Isley Brothersin jäsenenä Kellyn, Ronnien ja Vernonin kanssa. Vuonna 1957, Vernonin kuoleman jälkeen, jäljelle jääneet kolme vanhinta Isleytä muuttivat New Yorkiin etsimään levytyssopimusta, myöhemmin levyttäen pienemmille levy-yhtiöille, kunnes saivat sopimuksen RCA Recordsin kanssa vuonna 1959, jossa he kirjoittivat, äänittivät ja julkaisivat ensimmäisen merkittävän nauhoituksensa, ”Shoutin”. Saman vuoden kesään mennessä Isleyn perhe oli muuttanut Cincinnatista Englewoodiin New Jerseyyn.

”Shoutin” jälkeen veljekset levyttivät muille levymerkeille vaatimattomalla menestyksellä lukuun ottamatta top 40-hittiä ”Twist & Shout” ja Motown-hittiä ”This Old Heart of Mine (Is Weak for You)”. 1960-luvulla Rudy perusti veljiensä kanssa T-Neck Records-levymerkin mainostaakseen levytyksiään. Sen jälkeen heidän split Motown, he aktivoivat levy-yhtiö ja teki Grammy-palkittu smash ”It’ s Your Thing ” vuonna 1969. Vaikka Ron Isley oli yhtyeen merkittävä laulaja, Rudy äänitti muutaman soololaulun joihinkin Isley Brothersin kappaleisiin T-Neckin uudelleenaktivoitumisen jälkeen. Yhtyeen uudelleenorganisoiduttua yhtyeeksi nuorempien veljesten Ernie ja Marvin Isleyn sekä appivanhemman Chris Jasperin liityttyä yhtyeeseen, Rudy tunnettiin hatuista ja turkisasuista vaatteista ja myös kävelykepin kantamisesta. Rudy jakaa laulu veljiensä Ron ja Kelly hitit kuten ”Fight The Power”ja ” Livin’ in the Life”. Rudy lauloi myös muita kappaleita, kuten” You Still Feel the Need ”albumilta, Harvest for the World, ja heidän vuoden 1979 hitti,”It’ s a Disco Night (Rock Don ’ t Stop)”. Vuonna 1986 Rudyn vanhin veli Kelly kuoli yllättäen sydänkohtaukseen nukkuessaan. Kellyn kuolema järkytti Rudya, sillä veljekset olivat olleet läheisiä. Nauhoitettuaan albumit Smooth Sailin ’ ja Spend the Night Rudy Isley jätti yhtyeen ja musiikkiteollisuuden lopullisesti vuonna 1989 seuratakseen elinikäistä tavoitetta olla kristitty pappi. Rudy valittiin The Isleysin jäseneksi Rock and Roll Hall of Fameen vuonna 1992.