Articles

Protoplastin eristäminen

Protoplastit ovat soluja, joiden soluseinä on poistettu, yleensä pilkkoutumalla entsyymien avulla. Sellulaasientsyymit sulattavat selluloosan kasvien soluseinissä samalla kun pektinaasientsyymit hajottavat pektiiniä, joka pitää soluja koossa. Kun soluseinä on poistettu, syntyvä protoplasti on pallomainen.

digestio suoritetaan yleensä inkubaation jälkeen osmoottisessa liuoksessa (solupitoisuutta suurempi liuos, joka aiheuttaa solujen plasmolysoitumisen). Tämä helpottaa soluseinien sulamista. Roskat suodatetaan ja / tai sentrifugoidaan pois suspensiosta ja protoplastit sentrifugoidaan sitten pelletiksi. Sekoittamisen jälkeen protoplasteja voidaan viljellä väliaineilla, jotka indusoivat solujen jakautumista ja erilaistumista. Suuri määrä kasveja voidaan uudistaa yhdellä kokeella-gramma perunanlehtikudosta voi tuottaa esimerkiksi yli miljoona protoplastia.

Protoplasteja voidaan eristää useista kasvikudoksista: lehdistä, varsista, juurista, kukista, kannoista ja jopa siitepölystä. Käytetty eristäminen ja viljelyaine vaihtelevat lajin ja kudoksen mukaan, josta protoplastit eristettiin. Protoplasteja käytetään monin tavoin tutkimukseen ja kasvien parantamiseen. Niitä voidaan käsitellä eri tavoin (elektroporaatio, inkubaatio bakteereilla, lämpöshokki, korkea pH-hoito), jotta ne ottaisivat DNA: ta. Protoplasteja voidaan sitten viljellä ja kasveja uudistaa. Tällä tavoin geenimuunneltuja kasveja voidaan tuottaa helpommin kuin ehjiä soluja/kasveja käyttämällä.

kaukaista sukua olevat tai toisiinsa liittymättömät kasvit eivät pysty lisääntymään suvullisesti genomeinaan/lisääntymistapoinaan jne. ovat yhteensopimattomia. Sukulaislajeista peräisin olevat protoplastit voidaan fuusioida tuottamaan kasveja, joissa yhdistyvät toivottavat ominaisuudet, kuten taudinkestävyys, hyvä maku ja kylmänsietokyky. Fuusio tapahtuu sähkövirran avulla tai käsittelemällä kemikaaleja, kuten polyetyleeniglykolia (PEG). Fuusiotuotteet voidaan valita väliaineeseen, joka sisältää antibiootteja tai rikkakasvien torjunta-aineita. Nämä voidaan sitten saada muodostamaan versoja ja juuria ja hybridikasveja voidaan testata toivottavia ominaisuuksia.