Articles

Protoplastisolering

Protoplaster är celler som har fått sin cellvägg borttagen, vanligtvis genom matsmältning med enzymer. Cellulasenzymer smälter cellulosan i växtcellväggar medan pektinasenzymer bryter ner pektininnehållande celler tillsammans. När cellväggen har tagits bort är den resulterande protoplasten sfärisk i form.

Digestion utförs vanligtvis efter inkubation i ett osmoticum (en lösning med högre koncentration än cellinnehållet som får cellerna att plasmolysera). Detta gör cellväggarna lättare att smälta. Skräp filtreras och / eller centrifugeras ur suspensionen och protoplasterna centrifugeras sedan för att bilda en pellet. Vid resuspension kan protoplasterna odlas på media som inducerar celldelning och differentiering. Ett stort antal växter kan regenereras från ett enda experiment – ett gram potatisbladvävnad kan till exempel producera mer än en miljon protoplaster.

Protoplaster kan isoleras från en rad växtvävnader: löv, stjälkar, rötter, blommor, ståndarknappar och till och med pollen. Isolerings-och odlingsmedierna som används varierar med arten och med vävnaden från vilken protoplasterna isolerades. Protoplaster används på ett antal sätt för forskning och för växtförbättring. De kan behandlas på olika sätt (elektroporation, inkubation med bakterier, värmechock, hög pH-behandling) för att få dem att ta upp DNA. Protoplasterna kan sedan odlas och växter regenereras. På detta sätt kan genetiskt modifierade växter produceras lättare än vad som är möjligt med intakta celler/växter.

växter från avlägset besläktade eller orelaterade arter kan inte reproducera sexuellt som deras genom / reproduktionssätt etc. är oförenliga. Protoplaster från orelaterade arter kan smältas för att producera växter som kombinerar önskvärda egenskaper som sjukdomsresistens, god smak och kalltolerans. Fusion utförs genom applicering av en elektrisk ström eller genom behandling med kemikalier såsom polyetylenglykol (PEG). Fusionsprodukter kan väljas för på media som innehåller antibiotika eller herbicider. Dessa kan sedan induceras för att bilda skott och rötter och hybridväxter kan testas för önskvärda egenskaper.