Articles

Protoplast isolering

protoplaster er celler, der har fået deres cellevæg fjernet, normalt ved fordøjelse med f.eks. Cellulose fordøjer cellulosen i plantecellevægge, mens pektinase nedbryder de pektinholdende celler sammen. Når cellevæggen er fjernet, er den resulterende protoplast sfærisk i form.

fordøjelse udføres normalt efter inkubation i et osmoticum (en opløsning med højere koncentration end celleindholdet, der får cellerne til at plasmolyse). Dette gør cellevæggene lettere at fordøje. Affald filtreres og / eller centrifugeres ud af suspensionen, og protoplasterne centrifugeres derefter til dannelse af en pellet. Ved resuspension kan protoplasterne dyrkes på medier, der inducerer celledeling og differentiering. Et stort antal planter kan regenereres fra et enkelt eksperiment – et gram kartoffelbladvæv kan for eksempel producere mere end en million protoplaster.

protoplaster kan isoleres fra en række plantevæv: blade, stilke, rødder, blomster, støvknapper og endda pollen. De anvendte Isolations-og kulturmedier varierer med arten og med det væv, hvorfra protoplasterne blev isoleret. Protoplaster anvendes på en række måder til forskning og til planteforbedring. De kan behandles på forskellige måder (elektroporation, inkubation med bakterier, varmechok, høj pH-behandling) for at få dem til at optage DNA. Protoplasterne kan derefter dyrkes og planter regenereres. På denne måde kan genetisk manipulerede planter produceres lettere end muligt ved hjælp af intakte celler/planter.

planter fra fjernt beslægtede eller ikke-relaterede arter er ikke i stand til at reproducere seksuelt som deres genomer / reproduktionsmetoder osv. er uforenelige. Protoplaster fra ikke-relaterede arter kan smeltes sammen til at producere planter, der kombinerer ønskelige egenskaber såsom sygdomsresistens, god smag og koldtolerance. Fusion udføres ved anvendelse af en elektrisk strøm eller ved behandling med kemikalier såsom polyethylenglycol (PEG). Fusionsprodukter kan vælges til på medier, der indeholder antibiotika eller herbicider. Disse kan derefter induceres til dannelse af skud og rødder, og hybridplanter kan testes for ønskelige egenskaber.