Articles

Protoplaszt izoláció

A protoplasztok olyan sejtek, amelyek sejtfalát eltávolították, általában enzimekkel történő emésztéssel. A celluláz enzimek megemésztik a cellulózt a növényi sejtfalakban, míg a pektináz enzimek lebontják a pektint tartó sejteket. A sejtfal eltávolítása után a kapott protoplaszt gömb alakú.

az emésztést általában osmoticumban történő inkubálás után hajtják végre (a sejttartalomnál nagyobb koncentrációjú oldat, amely a sejtek plazmolízisét okozza). Ez megkönnyíti a sejtfalak emésztését. A törmeléket leszűrjük és / vagy centrifugáljuk a szuszpenzióból, majd a protoplasztokat centrifugáljuk, hogy pellet alakuljon ki. Reszuszpendáláskor a protoplasztok sejtosztódást és differenciálódást indukáló táptalajon tenyészthetők. Egyetlen kísérletből nagyszámú növény regenerálható-például egy gramm burgonya levélszövet több mint egymillió protoplasztot képes előállítani.

a protoplasztok számos növényi szövetből izolálhatók: levelekből, szárakból, gyökerekből, virágokból, portokból és még pollenből is. Az alkalmazott izolálás és táptalaj fajonként és szövetenként változik, amelyből a protoplasztokat izolálták. A protoplasztokat számos módon használják kutatásra és növényfejlesztésre. Különböző módon kezelhetők (elektroporáció, baktériumokkal történő inkubáció, hősokk, magas pH-kezelés), hogy rábírják őket a DNS felvételére. A protoplasztok ezután tenyészthetők és a növények regenerálhatók. Ily módon a géntechnológiával módosított növények könnyebben előállíthatók, mint az ép sejtek/növények felhasználásával lehetséges.

a távoli rokon vagy nem rokon fajok növényei nem képesek nemi úton szaporodni, mint genomjuk/szaporodási módjuk stb. összeegyeztethetetlenek. A nem rokon fajokból származó protoplasztok összeolvaszthatók, hogy olyan növényeket hozzanak létre, amelyek olyan kívánatos tulajdonságokat kombinálnak, mint a betegségekkel szembeni ellenálló képesség, a jó íz és a hidegtűrés. A fúziót elektromos áram alkalmazásával vagy vegyi anyagokkal, például polietilénglikollal (PEG) történő kezeléssel hajtják végre. A fúziós termékek kiválaszthatók antibiotikumokat vagy herbicideket tartalmazó táptalajon. Ezek aztán hajtásokat és gyökereket képezhetnek, a hibrid növények pedig tesztelhetők a kívánatos tulajdonságok szempontjából.